Лабораторія клітинних та тканинних культур відділу клітинних та тканинних технологій, Інститут генетичної та регенеративної медицини НАМН України, Київ, Україна Фенотипові зміни і проліферативний потенціал мезенхімальних стовбурових клітин з вартонових драглів пуповини людини в умовах культивування Анотація Мета. Розробити протокол отримання мезенхімальних стовбурових клітин (МСК) з вартонових драглів пуповини людини, дослідити їх фенотипові зміни і проліферативний потенціал в умовах культивування. Матеріали і методи. МСК пуповини людини культивували протягом 6 пасажів. Для дослідження морфологічних характеристик клітин у культурі застосовували методики забарвлення гематоксиліном та еозином, адаптовані для використання у культурах клітин, за Романовським-Гімзе, толуїдиновим синім. Для забарвлення ядерної ДНК використовували реагенти-інтеркалятори: Hoechst 33342, DАРІ та Еthidium bromid. Експресію поверхневих маркерів МСК (CD105, CD90, CD73 , CD34) досліджували за допомогою FACS-аналізу. Результати. В культурі МСК зберігають морфологічну ідентичність протягом 2 пасажів. В подальшому спостерігають тенденцію до зменшення інтенсивності експресії маркерів МСК, ознаки деградації культури, появу на пізніх пасажах спонтанного адипогенного та хондрогенного диференціювання. Висновки. При культивуванні МСК пуповини людини протягом 2 пасажів зберігають морфологічні характеристики і проліферативний потенціал, в подальшому вони втрачають мезенхімальний мультипотентний фенотип.
Исследованы подходы к генной терапии атеросклероза путем невирусного переноса гена аполипопротеина Al (ароАІ) -основного белкового компонента антиатерогенных липопротеинов -в клетки печени. Сконструирован плазмидный вектор для экспрессии полноразмерного гена. ароАІ человека в клетках млекопитающих. Конструкция содержит последовательности бактериальной плазмиды, позволяющие ей реплицироваться в клетках Escherihia coli, и кассету для экспрессии гена ароАІ, фланкированную инвертированными терминальными повторами аденоассоциированного вируса человека. Для доставки векторной ДНК использован синтетический полимер полиэтиленимин (ПЭИ, 25 кДа). Показано>, что в результате ПЭИ-опосредованной трансфекции клеток в культуре аналогичным вектором, содержащим репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка, 50-70 % клеток экспрессируют введенный ген. На экспериментальных животных, которым вводили конструкцию с геном ароАІ человека прямой инъекцией в печень, продемонст рировано, что белок АроАІ человека тестируется в плазме крови в течение 15 сут после доставки гена. ПЦР-анализ суммарной ДНК печени подопытных животных показал наличие расчетного фрагмента гена apoAJ человека у крыс через 15 дней после введения гена.
On the model of experimental analogue of human multiple sclerosis we studied the effects of the mesenchymal stem cells transfected with plasmid vector containing gene IL-10 (MSCs-T) on the functional state of the CNS in rats.Materials and methods. The experimental allergic encephalomyelitis (EАЕ) was induced with spinal cord homogenate of rats with complete Freund’s adjuvant. The mesenchymal stem cells (MSCs) were isolated by the explants technique from Wharton’s jelly of the human umbilical cord and culture up to two passages. Then the MSCs of second passage were transfected of plasmid vector with gene IL-10 and marker gene of green fluorescent protein. Cell transplantation was performed suboccipitally on the 17th day at a dose of 1 million cells in 100 µl of saline per animal.Results. In the open field test we have established that the use of MSCs-T transfected with gene IL-10 suppressed the vertical locomotor activity and elevated the emotional activity as well as partially corrects horizontal locomotor activity indexes which approach the indexes of intact animals.Conclusions. The use of MSCs transfected with plasmid vector with gene IL-10 in the rats with induced EAE is more effective method than treatment using non-transfected MSCs. Combined treatment with IL-10 + MSCs in ЕАЕ rats is more effective than treatment with transfected МSCs.
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.