Non-viral gene delivery of human apoA1 into mammalian cells in vitro and in vivo

Abstract

Исследованы подходы к генной терапии атеросклероза путем невирусного переноса гена аполипопротеина Al (ароАІ) -основного белкового компонента антиатерогенных липопротеинов -в клетки печени. Сконструирован плазмидный вектор для экспрессии полноразмерного гена. ароАІ человека в клетках млекопитающих. Конструкция содержит последовательности бактериальной плазмиды, позволяющие ей реплицироваться в клетках Escherihia coli, и кассету для экспрессии гена ароАІ, фланкированную инвертированными терминальными повторами аденоассоциированного вируса человека. Для доставки векторной ДНК использован синтетический полимер полиэтиленимин (ПЭИ, 25 кДа). Показано>, что в результате ПЭИ-опосредованной трансфекции клеток в культуре аналогичным вектором, содержащим репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка, 50-70 % клеток экспрессируют введенный ген. На экспериментальных животных, которым вводили конструкцию с геном ароАІ человека прямой инъекцией в печень, продемонст рировано, что белок АроАІ человека тестируется в плазме крови в течение 15 сут после доставки гена. ПЦР-анализ суммарной ДНК печени подопытных животных показал наличие расчетного фрагмента гена apoAJ человека у крыс через 15 дней после введения гена.

Inverted terminal repeats from adeno-associated virus-2 enhance the expression of the chimeric E2 glycoprotein gene of classical swine fever virus

“…The cells were cultured in a DMEM culture medium containing 10 % fetal calf serum, 100 U/ml of penicillin, and 100 µg/ml of streptomycin at +37 °C, 5 % CO 2 . The cells were transfected using 25-kDa branched polyethylenimine (PEI) (Sigma-Aldrich, USA) as described in [7]. For the MTT assay, HEK293 were detached from culture plastic for transfection by exposure to 0.25 % trypsin-0.02 % EDTA for 5 min.…”

“…Then, 3x10 5 cells were resuspended in 0.15 mL fresh medium. The pDNA/PEI complex formation was performed as described in [7]. The pDNA/PEI complexes were diluted by new DMEM medium to 0.85 mL and added to the cells suspension.…”

40 years within two epochs of two millennia

“…Yet in the beginning it was limited only to hereditary monogenic diseases and was named human gene engineering. We triggered the idea and experimental work on gene therapy of insulin-dependent diabetes and atherosclerosis [24][25][26][27][28][29]. The change of Epochs, Systems and financial tsunami because of them blocked this work for a long time.…”

“…There are no separate parts in the organism, everything interacts, inter-coordinates, interchanges, etc. In this area, the department was elaborating the cytokine therapy (restoration of blood supply of the ischemic kidney) [42][43], gene therapy (simulations of diabetes and atherosclerosis) [22][23][24][25][26][27][28][29], cell therapy (on the basis of the protocol of obtaining mesenchymal multipotent cells from gelatin of Wharton) [44]. As for the precise technological support (purification, testing, delivery, etc.…”