Recebido em 11/6/03; aceito em 2/12/03; publicado na web em 17/6/04 VALIDATION FOR CHROMATOGRAPHIC AND ELECTROPHORETIC METHODS. The validation of an analytical method is fundamental to implementing a quality control system in any analytical laboratory. As the separation techniques, GC, HPLC and CE, are often the principal tools used in such determinations, procedure validation is a necessity. The objective of this review is to describe the main aspects of validation in chromatographic and electrophoretic analysis, showing, in a general way, the similarities and differences between the guidelines established by the different Brazilian and international regulatory agencies.

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Recebido em 28/2/05; aceito em 22/6/05; publicado na web em 8/12/05 MONOLITHIC STATIONARY PHASES FOR CHROMATOGRAPHIC SEPARATIONS. Monolithic stationary phases represent a new generation of chromatographic separation media. These phases consist of a continuous separation bed prepared by in situ polymerization or consolidation inside the column tubing. In recent years, their simple preparation procedure, unique properties and excellent performance have attracted quite remarkable attention in liquid chromatography and capillary electrochromatography. This review summarizes the preparation, characterization and applications of monolithic stationary phases. The analytical potential of these columns is demonstrated with separations involving various families of compounds in different separation modes.Keywords: monolithic stationary phases; high performance liquid chromatography; capillary electrochromatography. INTRODUÇÃOApesar de mais de trinta anos de intensa pesquisa e do alto padrão alcançado atualmente pela tecnologia de colunas para cromatografia líquida, alguns problemas persistem e novos desenvolvimentos impulsionam pesquisas nesta área. O bom desempenho cromatográfico das colunas atuais é resultado do desenvolvimento da tecnologia de colunas, que permitiu a produção de partí-culas bem definidas e cada vez menores, concomitante à diminuição do comprimento e do diâmetro da coluna. Porém, as colunas recheadas com materiais particulados parecem ter alcançado seu limite de desempenho nos equipamentos convencionais. Embora seja tecnicamente possível uma maior redução do tamanho das partículas (< 3,0 µm), na prática esta possibilidade se torna inviável. A diminuição da permeabilidade das colunas recheadas com partí-culas muito pequenas provoca um aumento acentuado da resistên-cia ao fluxo de fase móvel e, conseqüentemente, uma considerável queda de pressão ao longo da coluna, resultando em separações de baixa eficiência [1][2][3] . Portanto, novas estratégias vêm sendo delineadas para obtenção de colunas mais eficientes.MacNair et al. 4 propuseram um sistema de cromatografia lí-quida de ultra-alta pressão (ultra-CLAE) ("ultrahigh-pressure liquid chromatography"), que possibilita separações a pressões de até uma ordem de grandeza superior ao sistema convencional de cromatografia líquida. A utilização de eletrocromatografia capilar (ECC) ("capillary electrochromatography") também foi sugerida em substituição aos equipamentos convencionais, pois a vazão da fase móvel é controlada por um fluxo eletroosmótico (FEO) ("electroosmotic flow") -fluxo de uma solução aquosa em um tubo com paredes e partículas eletrocarregadas sob a ação de campo elétrico alto -o qual independe de pressão 5 . Eficiências de colunas superiores a duzentos mil pratos m -1 são obtidas por esta técnica 2 . Porém, a utilização de instrumentação comum de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) ("high performance liquid chromatography"), obtendo eficiências de separação nestas proporções, também tornou-se possível com o desenvolvimento das colun...

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Miniaturized separation techniques have emerged as environmentally friendly alternatives to available separation methods. Nano-liquid chromatography (nano-LC), microchip devices and nano-capillary electrophoresis are miniaturized methods that minimize reagent consumption and waste generation. Furthermore, the low levels of analytes, especially in biological samples, promote the search for more highly sensitive techniques; coupled to mass spectrometry, nano-LC has great potential to become an indispensable tool for routine analysis of biomolecules. This short review presents the fundamental aspects of nano-LC analytical instrumentation, discussing practical considerations and the primary differences between miniaturized and conventional instrumentation. Some theoretical aspects are discussed to better explain both the potential and the principal limitations of nano-LC. Recent pharmaceutical and biomedical applications of this separation technique are also presented to indicate the satisfactory performance for complex matrices, especially for proteomic analysis, that is obtained with nano-LC.

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