RESPONS IMUN UDANG WINDU Penaeus monodon TERHADAP VAKSIN dsRNA VP-24 PADA DOSIS BERBEDA

Abstract

Peningkatan produksi udang windu Penaeus monodon terus diupayakan, salah satunya dengan peningkatan respons imun udang terhadap infeksi penyakit WSSV. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui respons imun udang terhadap pemberian vaksin dsRNA VP-24 pada berbagai dosis. Konstruksi vaksin dsRNA VP-24 dilakukan menggunakan Megascript kit dengan DNA genom VP-24 sebagai template. Vaksinasi dilakukan dengan metode injeksi pada udang windu yang berukuran rata-rata 15,88 ± 3,50 g; dosis vaksin yang diujikan adalah 0,02 µg; 0,2 µg; 2 µg; dan sebagai kontrol adalah udang yang tidak diberi vaksin. Penelitian terdiri atas empat perlakuan dosis vaksin dengan masing-masing dua ulangan dan dipelihara selama lima hari. Uji tantang dilakukan selama enam hari dengan menginjeksi virus WSSV dalam saline solution (1:3 v/v). Pengamatan terhadap sintasan udang windu dilakukan setiap hari, sedangkan penghitungan total hemocyte (THC) dan ProPO diamati pada hari I, III, dan VI setelah diinfeksi WSSV. Pada akhir pengujian dilakukan pengambilan jaringan hepatopankreas untuk analisis histopatologi. Analisis data dilakukan secara statistik dengan analisis ragam (ANOVA). Hasil yang diperoleh memperlihatkan bahwa injeksi vaksin dsRNA VP-24 dengan dosis 0,2 µg memiliki pengaruh yang signifikan terhadap sintasan dan respons imun udang windu (P<0,05). Vaksin dsRNA VP-24 dengan dosis 0,2 µg mampu memberikan sintasan udang windu P. monodon sebesar 65% dan meningkatkan respons imun udang dengan THC (1.550 x 10t sel/mL) dan ProPO (0,042 Abs).One of the efforts to increase the production of tiger shrimp Penaeus monodon is increasing the immune response against WSSV disease. This study aims to evaluate shrimp immune response to dsRNA VP-24 vaccination at various doses. The construction of dsRNA VP-24 vaccine was performed using Megascript kit with the VP-24 DNA genome as a template. The vaccination was done by injection method on shrimp sized 15.88 ± 3.50 g. The tested vaccine doses (treatments) were 0.02 ¼g; 0.2 ¼g; 2 ¼g; and unvaccinated shrimp as the control. The study consisted of four treatments of vaccine doses with two replicates for each treatment. The challenge test was performed by injecting the WSSV virus in saline solution (1:3 v/v). The observation on shrimp survival rate was done daily, while the total hemocyte count (THC) and ProPO observation were performed on the 1st day, 3rd day, and 6th day after WSSV infection. At the end of the experiment, samplings of hepatopancreas for analysis were performed. Data were statistically analyzed using ANOVA. The present study indicated that the injection of 0.2 ¼ g dsRNA VP-24 vaccine had a significant effect on the survival rate and immune response of shrimp (P<0.05). The dose of 0.2 ¼g dsRNA VP-24 had resulted in 65% of survival rate and increased immune response of P. monodon with THC (1,550 x 10t cell/mL) and ProPO (0.042 Abs).

PENGARUH APLIKASI dsRNA VP-15 IN VITRO DAN IN VIVO TERHADAP SINTASAN DAN RESPONS IMUN UDANG WINDU Penaeus monodon

“…Aplikasi vaksin dsRNA khususnya gen virulensi penkode viral protein (VP) dari WSSV pada udang windu masih sangat terbatas. Sebagai langkah awal, telah dilakukan karakterisasi gen penyandi VP-15 dan VP-24 dari WSSV dan aplikasi dsRNA yang diproduksi secara in vitro (Tenriulo et al, 2016;Parenrengi et al, 2017;Parenrengi et al, 2018;Mulyaningrum et al, 2018). Produksi dsRNA secara in vitro menggunakan kit masih terkendala dalam hal biaya produksi yang tinggi dan rekombinan dsRNA.…”

“…Studi pendahuluan yang dilakukan sebelumnya oleh Parenrengi et al (2018) menunjukkan bahwa dengan aplikasi dsRNA VP-15 dapat meningkatkan sintasan udang windu hingga 36,7% dibandingkan dengan tanpa penggunaan vaksin atau kontrol (3,3%) atau setara dengan nilai RPS (relative percentage survival) sebesar 37,9%. Pengamatan terhadap sintasan udang windu selama uji tantang pemberian vaksin dsRNA VP-24 dengan dosis 0,2 ìg memperlihatkan peningkatan sintasan yang signifikan pada udang windu sebesar 65% dibandingkan kontrol hanya 10% (Mulyaningrum et al, 2018). Peningkatan sintasan pada udang yang divaksin dengan dsRNA dari serangan WSSV telah dilaporkan sebelumnya oleh Krishnan et al (2009)…”

“…Hasil penelitian ini juga mengungkapkan bahwa aktivitas proPO semakin meningkat dengan semakin lamanya hewan uji terpapar dengan WSSV. Hal yang sama juga didapatkan pada aplikasi dsRNA VP-24, di mana aktivitas proPO udang windu meningkat pada 24 jam hingga 72 jam setelah ditantang dengan WSSV (Mulyaningrum et al, 2018). Sedangkan Paria et al (2013) melaporkan bahwa uji tantang WSSV pada pengujian dsRNA VP-28 tidak memberikan perubahan yang signifikan pada ekspresi gen proPO udang windu hingga 24 jam, namun terjadi peningkatan ekspresi hingga tiga kali lipat pada 48 jam setelah injeksi.…”

“…Kerusakan jaringan hepatopankreas udang windu akibat adanya infeksi WSSV telah dilaporkan oleh Firmansyah (2002) dan Rahmawati (2002) yang ditandai adanya badan inklusi yang sentronuklear, eosinofilik, dan terpisah dari membran sel, dan akhirnya kemudian benangbenang kromatin menepi. Mulyaningrum et al (2018) memperlihatkan adanya beberapa tingkat kerusakan sel jaringan akibat adanya infeksi WSSV pada udang windu, seperti inklusi badan, nekrotik sel, peningkatan degenerasi lemak, dan lisis sel pada hepatopankreas. Perbandingan antara jaringan hepatopankreas udang windu setelah ditantang dengan WSSV telah dilaporkan sebelumnya oleh Parenrengi et al (2018) di mana aplikasi vaksin dsRNA memperlihatkan kerusakan yang lebih rendah dibandingkan dengan udang windu kontrol atau tanpa perlakuan penggunakan dsRNA.…”

Application of dsRNA VP15-WSSV by Oral Vaccination to Increase Survival Rate and Response Immunes of Tiger Shrimp Penaeus monodon

“…A gene encoding VP15 isolated from WSSV infected tiger shrimp Application of dsRNA VP15-WSSV by Oral Vaccination to Increase Survival Rate and Response Immunes of Tiger Shrimp... in Indonesia has been identified and characterized by Parenrengi et al (2017). The successful production by invitro using MEGAscript RNAi kit and in-vivo (Mulyaningrum et al, 2018;Parenrengi et al, 2018) has been proven led to apply in aquaculture for preventing the WSD. Application of dsRNA produced by in-vivo showed better survival and immune response than control shrimp for both the injection and the immersion method (Parenrengi et al, 2018(Parenrengi et al, , 2019.…”