Determinação de metodologia para oisolamento de protoplastos de tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort.)

Oliveira, R. P. de; Mendes, Beatriz Madalena Januzzi; Neto, Augusto Tulmann

doi:10.1590/s0103-90161995000100007

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“…Além destes fatores, outros devem ser estudados para a maximização do isolamento das cultivares estudadas, tais como o subcultivo de calos em meio de cultura com menor quantidade de carboidrato, pré-tratamento enzimático e idade dos calos embriogênicos (OLIVEIRA et al, 1995).…”

Section: Embriogênese Somáticaunclassified

Isolamento, cultura de protoplastos e regeneração de plantas de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck)

Castro¹

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Dissertação apresentada para obtenção do título de Mestre em Ciências. Área de concentração: Fitotecnia Piracicaba 2009 Piracicaba Aos meus queridos pais Maria Cristina e Nelson, por todo o apoio e compreensão, e aos meus avós Martha e Wilson (in memorian), Dalvina (in memorian) e Cícero (in memorian). OFEREÇO Ao meu namorado Patrick, por todo o carinho e incentivo; às minhas irmãs Letícia e Luiza pelo companheirismo. DEDICO 4 5 AGRADECIMENTOS Agradeço a meus queridos pais pelo apoio, força e compreensão. Às minhas irmãs pelo companheirismo. Ao meu namorado Patrick Marques Dourado pelo carinho e incentivo. Ao professor Drº Francisco de Assis Alves Mourão Filho pela orientação, pelo crédito, pela oportunidade concedida para a realização do estágio de prática profissionalizante e do mestrado e pelos ensinamentos. À professora Drª Beatriz Januzzi Mendes pela colaboração e sugestões. Ao professor Drº Paulo Hercilio Viegas Rodrigues pelas idéias, apoio e amizade. Aos professores da dos Programas de Pós-Graduação da ESALQ pelos conhecimentos transmitidos. Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pela concessão da bolsa de estudos. Ao Fundo de Defesa da Citricultura (Fundecitrus) pelo apoio financeiro a este trabalho. Aos colegas do Fabiana pelo apoio, momentos de descontração e um ótimo convívio, e em especial à Luzia, pela sinceridade, amizade, palavras de conforto e auxílio nas horas difíceis. Aos colegas que já passaram pelo Laboratório, Suane, Rosely, Gustavo, Amâncio, Waner Júnior e Jannayna pela convivência. ABSTRACT Isolation, protoplast culture and regeneration of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck)Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), "Pêra", "Natal", "Lima Verde", "Hamlin" and "Westin". This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 10 4 ; 5 x 10 4 ; 10 5 ; 2 x 10 5 e 3 x 10 5 protoplasts.mL -1 in EME 0,7M, BH 3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars "Hamlin", "Natal" and "Pêra", and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar "Westin". Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher ...

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Section: Embriogênese Somáticaunclassified

Isolamento, cultura de protoplastos e regeneração de plantas de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck)

Castro¹

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Plant regeneration from protoplast of Brazilian citrus cultivars

Gloria¹,

Filho²,

Mendes³

2000

Pesq. agropec. bras.

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A procedure is described to regenerate plants from protoplasts of Brazilian citrus cultivars, after isolation, fusion and culture. Protoplasts were isolated from embryogenic cell suspension cultures and from leaf mesophyll of seedlings germinated in vitro. The enzyme solution for protoplast isolation was composed of mannitol (0.7 M), CaCl2 (24.5 mM), NaH2PO4 (0.92 mM), MES (6.15 mM), cellulase (Onozuka RS - Yakult, 1%), macerase (Onozuka R10 - Yakult, 1%) and pectolyase Y-23 (Seishin, 0.2%). Protoplast culture in liquid medium after chemical fusion lead to the formation of callus colonies further adapted to solid medium. Somatic embryo formation occurred spontaneously after two subcultures, on modified MT medium supplemented with 500 mg/L of malt extract. Well defined embryos were germinated in modified MT medium with addition of GA3 (2.0 muM) and malt extract (500 mg/L). Plant regeneration was also achieved by adventitious shoots obtained through direct organogenesis of not well defined embryos in modified MT medium with addition of malt extract (500 mg/L), BAP (1.32 muM), NAA (1.07 muM) and coconut water (10 mL/L). Plantlets were transferred to root medium. Rooted plants were transferred to a greenhouse for further adaptation and development.

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Calogênese, embriogênese somática e isolamento de protoplastos em variedades de laranja doce

Benedito¹,

Filho

Mendes

2000

Sci. agric. (Piracicaba, Braz.)

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Com o objetivo de produzir calos embriogênicos de citros, óvulos abortados de frutos maduros de 6 variedades de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), ‘Bahia Cabula’, ‘Baianinha’, ‘Hamlin’, ‘Orvalho de Mel’, ‘Rubi’ e ‘Valência’ foram introduzidos em meio de cultivo MT modificado com adição de extrato de malte, com e sem adição de 5 mg L-1 benziladenina (BA). Os calos obtidos das variedades ‘Bahia Cabula’, ‘Orvalho de Mel’, ‘Rubi’ e ‘Valência’ foram cultivados em meio basal MT, contendo os carboidratos maltose, galactose, lactose, glicose ou sacarose nas concentrações de 18; 37; 75; 110 e 150 mM para a indução da embriogênese somática. Os calos destas mesmas variedades foram submetidos ao isolamento de protoplastos, com o uso de 3 soluções enzimáticas. Os resultados revelaram que há influência do genótipo sobre a calogênese. A embriogênese somática foi estimulada na presença de galactose, para a maioria das variedades. A solução enzimática composta de 1% de celulase, 1% de macerase e 0,2% de pectoliase foi a mais adequada para o isolamento de protoplastos a partir de calos das variedades de laranja doce estudadas.

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Determinação de metodologia para oisolamento de protoplastos de tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort.)

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Isolamento, cultura de protoplastos e regeneração de plantas de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck)

Isolamento, cultura de protoplastos e regeneração de plantas de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck)

Plant regeneration from protoplast of Brazilian citrus cultivars

Calogênese, embriogênese somática e isolamento de protoplastos em variedades de laranja doce

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