Determinação de proteínas totais via espectrofometria: vantagens e desvantagens dos métodos existentes

Abstract

tein is used in several areas such as clinical analysis, food science and technology, biochemistry, protein chemistry, physiology. Five spectrophotometric methods are mostly used: biuret, Lowry, Bradford, Smith and UV absorption. In this review a general overview of these methods is presented (interferences, applications); other methodologies are also discussed.Keywords: protein; spectrophotometry; protein analysis. DIVULGAÇÃO INTRODUÇÃOO desenvolvimento de metodologias e estudos comparativos de metodologias espectrofotométricas para a determinação de proteínas totais sempre foram de grande interesse para profissionais, tanto ligados à indústria de alimentos, laboratórios de análises clínicas, como para pesquisadores de diversas áreas. Apesar de os profissionais serem de diferentes áreas e, portanto, com objetivos diferentes, observamos que os questionamentos são sempre os mesmos: Quais são os principais interferentes no método que estou usando? Qual é o método mais adequado para meu caso? Qual é o princípio envolvido no método que estou usando?Esta revisão, portanto, tem por objetivo abordar diversos aspectos dos métodos espectrofotométricos utilizados para a determinação de proteínas totais em diferentes meios.As proteínas desempenham papéis extremamente importantes, na maioria dos processos biológicos, atuando como enzimas, hormônios, neurotransmissores, transportadores através das membranas celulares e outros 1,2 .O desenvolvimento de metodologias para determinar proteínas tem, cada vez mais, se tornado de fundamental relevância em várias áreas do conhecimento, como por exemplo, em análises clínicas 1 , favorecendo o diagnóstico de certas doenças correlacionadas com a alteração da quantidade de proteínas nos fluidos biológicos; em nutrição animal 3 , ressaltando o aproveitamento racional de nutrientes; em problemas relacionados à nutrição humana 1,4,5 , como obesidade, anorexia nervosa, desnutrição, devendo as dietas apresentar teor balanceado de proteínas; em tecnologia e ciências de alimentos 6 , objetivando o aproveitamento racional da matéria prima e o melhoramento dos produtos novos e já existentes; em ecologia 7 , relacionando o comportamento alimentar com a quantidade de proteína ingerida dos alimentos, favorecendo o entendimento dos vários aspectos da vida dos animais silvestres; e na área de química de proteínas objetivando purificar novas proteínas e enzimas 8 .Estas são apenas algumas das mais importantes aplicações analíticas para metodologias de determinação de proteínas totais; obviamente, existem muitas outras de grande relevância.Os métodos para a determinação da concentração de proteí-nas totais são muito variados, no entanto, as metodologias mais utilizadas são as espectrofotométricas no ultra-violeta e no visível (UV-Vis). MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS MAIS UTILIZADOS PARA A DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAISMuitos métodos espectrofotométricos, ao longo dos anos, têm sido propostos para a determinação de proteínas totais, mas não existe uma metodologia considerada de uso universal para todos ...

Avaliação de métodos espectrofotométricos para determinação de proteína em amostras de lagoas de estabilização

“…Segundo Zaia et al (1998), estas substâncias interferentes podem aumentar a absorbância do branco, reduzir a absortividade específica ou formar precipitado. Na Figura 5 pode ser observado o coeficiente angular obtido da análise de regressão linear com padrão soro albumina ( ) e adição deste padrão à amostra ( ).…”

“…Segundo Zaia et al (1998), o principal deles é o conhecimento mais preciso possível dos constituintes da amostra e de suas concentrações, o que facilita na identificação de possíveis interferentes e ajuda na escolha do método mais apropriado.…”

“…Neste método, ocorre redução dos constituintes ativos do reagente folin-fenol por meio das cadeias laterais de alguns aminoácidos que contribuem segundo Zaia et al (1998), com quatro elétrons ou pela retirada de dois elétrons de cada unidade tetrapeptídica dos peptídeos e proteínas, que é facilitada pela formação do quelato entre o cobre (II) e peptídeos/proteínas, tornando a reação biureto mais sensível. Segundo Wilson & Walker (1995), o limite de detecção deste método é de 1x10 -5 mg.L -1 .…”

“…No método BCA -Ácido Bicinconínico (Smith et al, 1985), com leituras a 562 nm e limite de detecção de 0,5 mg.L -1 , ocorre formação de complexo colorido com BCA, pela redução do Cu +2 , em meio alcalino, com proteínas (Zaia et al, 1998). Smith et al (1985) declararam que este método monitora os íons cobre monovalentes produzidos na reação de proteínas com cobre bivalente, aumentando a sensibilidade do método, como ocorre no de Lowry.…”

“…Para Zaia et al (1998), vários fatores podem ser analisados antes da escolha da metodologia para determinação de proteína total, como sensibilidade, reprodutibilidade, simplicidade, poucas substâncias interferentes, disponibilidade de volume de amostra, rapidez, baixo custo, similaridade às concentrações ambientais e toxicidade do reagente. Poucos estudos metodológicos têm sido realizados para comparar o desempenho dos métodos espectrofotométricos na determinação de proteínas em amostras ambientais, especialmente em águas residuárias.…”