Internalization of hydrophilic molecules into yeast cytosol is required for different applications such as cell transformation or preservation of water soluble components by bioencapsulation. However, these molecules are not able to cross the plasma membrane and strategies have to be developed. Recent works revealed that osmotic perturbations could induce non-lethal transient permeabilization of the plasma membrane. In this work, we endeavored to clarify the phenomenon of permeabilization during rehydration after a mild hyperosmotic perturbation in order to evaluate the possibility of hydrophilic molecule internalization in yeast by this treatment. Rehydration step is particularly interesting because the large entry of water into the cells could help the internalization of molecules. The internalization of a fluorescent molecule [fluorescein isothiocyanate Dextran (FITC-Dextran), 20 kDa], added during the rehydration after a sublethal hyperosmotic treatment, was studied in Saccharomyces cerevisiae yeast cells. The internalization kinetic and the localization of the fluorescent molecules were studied by flow cytometry and fluorescence confocal microscopy. Our results show that the rehydration leads to the rapid internalization of FITC-Dextran due to a transient plasma membrane permeabilization. Thus, osmoporation, i.e. plasma membrane poration by modifications of osmotic pressure of the extracellular medium, could be a new and simple way to deliver molecules of particular interest into yeasts.
RESUMO -As características estruturais da levedura S. cerevisiae tornam este microrganismo um promissor veículo para a bioencapsulação de substâncias de interesse alimentício e/ou farmacológico. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da concentração de fisetina (C), temperatura (T) e pressão osmótica (P) sobre a eficiência da bioencapsulação da fisetina mediante choque osmótico. A metodologia usada para avaliar a eficiência da encapsulação (EE%) foi a quantificação do flavonoide utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). O teor de fisetina internalizada (FI) foi relacionado com a EE% e a massa de fisetina inicialmente adicionada. Os resultados mostraram que a melhor EE% foi de 14% com C = 2 mg.mL
INTRODUÇÃOO interesse das indústrias alimentícias por produtos que possuam em sua formulação compostos promotores da saúde humana é crescente. A fisetina (286 Da) é um flavonoide extraído de frutas como o morango, tomate, uva e pêssego, previamente apontado por sua capacidade de reduzir o avanço de células cancerígenas na próstata (Khan et al., 2008), auxiliar no tratamento de doenças neurodegenerativas (Maher, 2008) e reduzir o efeito de respostas inflamatórias pulmonares (Geraets et al., 2009). No entanto, devido a sua sensibilidade às alterações físico-químicas possui baixa biodisponibilidade in vivo (Sengupta et al., 2005). Neste caso é essencial envolver a molécula por uma membrana que seja capaz de impedir a sua degradação. Dardelle et al. (2007) perceberam que óleos essenciais inseridos no envelope microbiano (parede e membrana celular) da levedura S. cerevisiae ficam protegidos mesmo com variações de temperatura, umidade e pH. A membrana plasmática da levedura age como barreira seletora de moléculas essenciais para o seu metabolismo. Apesar disso, moléculas com pesos
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