ORGANOGÊNESE IN VITRO DE Citrus EM FUNÇÃO DE CONCENTRAÇÕES DE BAP E SECCIONAMENTO DO EXPLANTE

Moura, Thaís Lacava De; Almeida, Weliton Antônio Bastos de; Mendes, Beatriz Madalena Januzzi; Filho, Francisco de Assis Alves Mourão

doi:10.1590/s0100-29452001000200007

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“…These explants can be epicotyl segments excised from seedlings germinated in darkness (Bond & Roose, 1998) and later transferred to culture conditions involving a 16 hours photoperiod, varying from one to three weeks (Cervera et al, 1998) up to three months (Pérez-Molphe-Balch & Ochoa-Alejo, 1998) or even excised from seedlings germinated under light conditions (Moore et al, 1992) or internodal segments excised from seedlings cultivated in greenhouse (Peña et al, 1995a(Peña et al, , 1997. In this work it was chosen to start using explants excised from seedlings germinated in vitro because of the efficiency in regenerating shoots (Moura et al, 2001) and the good control of contamination. The explants responded very well to the in vitro culture and the germination in darkness for two weeks and after that, transferring to 16 hours photoperiod allows the regeneration of GUS + plants (Table 1).…”

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

Agrobacterium-mediated genetic transformation of 'Hamlin' sweet orange

Mendes

Boscariol

Filho³

et al. 2002

Pesq. agropec. bras.

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The development and optimization of efficient transformation protocols is essential in new citrus breeding programs, not only for rootstock, but also for scion improvement. Transgenic Hamlin sweet orange (Citrus sinensis (L.) Osbeck) plants were obtained by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of epicotyl segments collected from seedlings germinated in vitro. Factors influencing genetic transformation efficiency were evaluated including seedling incubation conditions, time of inoculation with Agrobacterium and co-culture conditions. Epicotyl segments were adequate explants for transformation, regenerating plants by direct organogenesis. Higher percentage of transformation was obtained with explants collected from seedlings germinated in darkness, transferred to 16 hours photoperiod for 2-3 weeks, and inoculated with Agrobacterium for 15-45 min. The best co-culture condition was the incubation of the explants in darkness, for three days in culture medium supplemented with 100 µM of acetosyringone. Genetic transformation was confirmed by performing ß-glucoronidase (GUS) assays and, subsequently, by PCR amplification for the nptII and GUS genes.Index terms: Citrus sinensis, epicotyls, seedlings, transgenics, breeding methods. Transformação genética de laranja Hamlin via AgrobacteriumResumo O desenvolvimento e otimização de protocolos eficientes de transformação genética é essencial nos programas atuais de melhoramento de citros, tanto para porta-enxertos, como para copas de valor comercial. Plantas transgênicas de laranja Hamlin (Citrus sinensis (L.) Osbeck) foram obtidas pela transformação genética de segmentos de epicótilo, coletados de plântulas germinadas in vitro, com Agrobacterium tumefaciens. Foram avaliados fatores que influenciam a eficiência da transformação genética, como: condições de incubação das plântulas utilizadas para coleta de explantes, tempo de inoculação com Agrobacterium e condições de co-cultivo. A regeneração de plantas a partir de segmentos de epicótilo ocorreu em alta freqüência, por organogênese direta. A maior porcentagem de plantas transgênicas foi obtida utilizando-se explantes coletados de plântulas germinadas no escuro e posteriormente transferidas, por 2-3 semanas, para condições de 16 horas de fotoperíodo, e infectados com Agrobacterium por um período de 15-45 minutos. As melhores condições de co-cultivo foram a incubação dos explantes no escuro, por três dias, em meio de cultura suplementado com 100 µM de acetoseringona. A transformação genética foi confirmada pelo teste histoquímico para ß-glucoronidase (GUS) e, posteriormente, pela amplificação de DNA, por PCR, para detecção dos genes nptII e GUS.Termos para indexação: Citrus sinensis, epicótilo, plântulas, transgênicos, métodos de melhoramento.

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Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

Agrobacterium-mediated genetic transformation of 'Hamlin' sweet orange

Mendes

Boscariol

Filho³

et al. 2002

Pesq. agropec. bras.

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“…Em seguida, foram lavadas três vezes em água estéril e incubadas em tubos de ensaio com 15 mL de meio de cultura MT (Murashige & Tucker, 1969), acrescido de 25 g L -1 de sacarose, solidificado com ágar (0,8%) e mantido a 27±2ºC em ausência de luz, por três semanas, seguidas de duas semanas sob fotoperíodo de 16 horas (40 µmol m -2 s -1 de intensidade luminosa). Após esse período, segmentos de epicótilo das plântulas germinadas foram utilizados como explantes, para as avaliações de indução de organogênese in vitro.…”

Section: Methodsunclassified

“…Almeida et al (2003) realizaram estudos anatômicos em segmentos internodais de citros, cultivados in vitro, e constataram que as gemas adventícias têm origem endógena, mais precisamente, formando-se por sucessivas divisões das células cambiais. Moura et al (2001) induziram maior número de gemas por explante, quando seccionaram as extremidades dos explantes de citros e relataram que esse aumento está relacionado com uma maior formação de zonas meristemáticas, em função do corte nos tecidos.…”

Section: Comprimento Do Explante (Cm) Explantes Responsivos (%)unclassified

Regeneração de plantas de laranja 'Pêra' via organogênese in vitro

Silva

Costa

Souza

et al. 2005

Pesq. agropec. bras.

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Resumo -O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo eficiente de regeneração de plantas in vitro, via organogênese em explante juvenil de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis L. Osbeck), para atender futuros trabalhos de transformação genética. Segmentos de epicótilo utilizados como explantes foram introduzidos em meio de cultura MT. A fim de maximizar a regeneração de plantas in vitro, foram realizados experimentos para avaliar as concentrações de BAP no meio de cultivo (0, 1, 2, 3 ou 4 mg L -1 ), tamanho (0,25, 0,5 ou 1 cm), polaridade (basal, medial e apical), posição (horizontal ou vertical), condições de luminosidade (fotoperíodo de 16 horas e escuro por 30 dias) e seccionamento nas extremidades dos explantes, bem como melhores condições para garantir plantas enraizadas (meio MT, MT/2, com ou sem auxina e microenxertia). A combinação de 3 mg L -1 de BAP com segmentos de 0,25 cm de comprimento foi eficiente na resposta organogenética. Segmentos apicais e mediais apresentaram melhores resultados do que os basais. O cultivo dos segmentos na posição horizontal, em fotoperíodo de 16 horas, foi mais eficiente do que na posição vertical. Não houve melhora na indução da organogênese in vitro, quando foram seccionadas as extremidades dos explantes. A microenxertia assegurou 100% de brotos enraizados.Termos para indexação: Citrus sinensis, cultura de tecidos, explante juvenil, benzilaminopurina, microenxertia. Regeneration of 'Pera' sweet orange plants through in vitro organogenesisAbstract -The objective of this work was to establish an efficient protocol for in vitro regeneration of plants through organogenesis of sweet orange 'Pera' (Citrus sinensis L. Osbeck) juvenile explants, in order to give support for future studies of genetic transformation. Epicotyl segments used as explants were introduced in MT culture media. To maximize the regeneration of in vitro plants, experiments were performed to evaluate different concentrations of BAP in the culture media (0, 1, 2, 3 or 4 mg L -1 ), size (0.25, 0.5 or 1 cm), polarity (basal, medium, and apical), position (horizontal or vertical), luminosity conditions (photoperiod of 16 hours, and darkness for 30 days), and incision of the segment ends. In addition, better conditions for obtaining rooted plants (culture media MT, MT/2, with and without auxin and micrografting) were studied. The combination of 3 mg L -1 BAP with segments of 0.25 cm length was efficient for the organogenetic response. Segment apices and mediums were more efficient comparing to the basal parts. Culturing the segments in the horizontal position, with a photoperiod of 16 hours, was more efficient than in the vertical position. There was no improvement in the induction of in vitro organogenesis, when the explant ends were incised. Micrografting assured 100% of rooted shoots.

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“…Para o cultivo asséptico de sementes in vitro, são necessários métodos eficientes de esterilização, visto que, sem ela, o crescimento pode ser inibido ou afetado (CID, 2001). Na literatura, os trabalhos que envolvem técnicas de propagação in vitro apresentam o uso de compostos como hipoclorito de sódio em concentrações e por tempos variados (PASSOS et al, 2004;MOURA et al, 2001;SOUZA;GONÇALVES;MACHADO NETO, 1999) Os agentes gelificantes são necessários, considerando que as plantas obtidas devem ficar sobre um suporte, para não afundarem. O ágar-ágar é um tipo de agente gelificante de natureza polissacarídica produzido por algas (Gelidium amansii) (CID, 2001).…”

Section: Introductionunclassified

Avaliação de métodos de esterilização, concentração de ágar e composição de meio de cultura para propagação in vitro de Pimpinella anisum (Linn.) – Apiaceae

Tambosi¹,

Rogge-Renner²

2010

Semin. Cienc. Biol. Saude

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Avaliação de métodos de esterilização, concentração de ágar e composição de meio de cultura para propagação in vitro dePimpinella anisum (Linn.) -Apiaceae Evaluation of asepsis, agar concentration and culture medium composition methods for in vitro propagation of Pimpinella anisum (Linn.) -ApiaceaeGabriela Tambosi ¹*; Gladys Daniela Rogge-Renner² ResumoPimpinella anisum é uma planta popularmente utilizada como medicinal para diversas enfermidades, embora não existam estudos que comprovem sua atividade farmacológica. A espécie não apresenta metodologias conhecidas de assepsia e condições adequadas para experimentos de propagação in vitro. Para avaliar a forma mais eficiente de esterilização de sementes da espécie e melhores concentrações de ágar e sais do meio MS, foram feitos cinco testes de assepsia, bem como testes de avaliação do aumento de massa seca a partir de sementes germinadas em ágar 3g/L e 6g/L e MS nas concentrações 0%, 25%, 50%, 75% e 100%. A imersão em solução hipoclorito de sódio 2% por 20 minutos e lavagem em água destilada promoveu 100% de plântulas estéreis. O maior aumento de massa seca foi obtido com concentração de sais do meio MS de 75% e 100%, e as diferentes concentrações de ágar não influenciaram a obtenção de maior percentual de massa de plântulas cultivadas. Palavras-chave: Anis. Micropropagação. Assepsia. Nutrição. AbstractPimpinella anisum, is a plant species popularly used as treatment for different diseases, although no studies exist which could prove its pharmacological activity. This species has no known methods of asepsis and adequate conditions to conduct in vitro propagation trials. To assess the most efficient method of seed sterilization and the most favorable concentration of agar and MS salts, five tests of asepsis and tests to evaluate the dry mass increase of germinated seed in 3g/L and 6g/L of agar and MS in concentrations of 0%, 25%, 50%, 75% and 100%, were carried out. The samples that were immersed in a concentration of 2% sodium hypochlorite for 20 minutes and then washed in distilled water produced 100% of sterile plantlets. The greatest increase in dry mass was obtained with 75% and 100% of MS salts. Furthermore, the different concentrations of agar did not influence the percentage of the plantlets dry mass.

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ORGANOGÊNESE IN VITRO DE Citrus EM FUNÇÃO DE CONCENTRAÇÕES DE BAP E SECCIONAMENTO DO EXPLANTE

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Agrobacterium-mediated genetic transformation of 'Hamlin' sweet orange

Agrobacterium-mediated genetic transformation of 'Hamlin' sweet orange

Regeneração de plantas de laranja 'Pêra' via organogênese in vitro

Avaliação de métodos de esterilização, concentração de ágar e composição de meio de cultura para propagação in vitro de Pimpinella anisum (Linn.) – Apiaceae

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