Comparaison de Deux Antigénes de Nature polysaccharidique pour le Diagnostic Sérologique par ELISA de la Pleuropneumonie Porcine (Sérotype 5)

Abstract

Summary Comparison of two polysaccharidic antigens for ELISA serodiagnosis of pig pleuropneumonia (serotype 5) Two antigens of polysaccharidic nature were evaluated for their specificity in serodiagnosis of porcine pleuropneumonia (serotype 5). Recently, long chains lipopolysaccharides (LC‐LPS) was shown to increase the specificity of the ELISA test for A. pleuropneumoniae serotype 5 compared to a saline extract of boiled‐formalinized whole cells. Nevertheless, some cross reactions were noticed with LC‐LPS. We have thus cleaved the LPS molecule at the ketosidic bond between the lipid A and the core. The lipid A was separated from the polysaccharide (PS) by centrifugation. With an indirect sandwich ELISA, it was possible to demonstrate that the PS yielded positive responses with homologous sera (serotype 5) and negative responses with heterologous sera (serotype 3 and undeterminated serotype). Overall, the use of the PS did not notably increase the specificity of the ELISA test. Since production of PS from LC‐LPS and its separation from the lipid A is not simple, we do not recommend its use in serodiagnosis. Résumé Deux antigènes de nature polysaccharidique ont été évalués pour leur spécificité dans le diagnostic sérologique de la pleuropneumonie porcine (sérotype 5). Récemment, les lipopolysaccharides à longues chaînes (LC‐LPS), ont permis une augmentation de la spécificité par rapport à l'utilisation d'un extrait salin à chaud de cellules totales formolées. Toutefois, certaines réactions croisées ont aussi été notées avec les LC‐LPS. Nous avons donc scindé les LC‐LPS au niveau du lien cétosidique présent entre le lipide A et le core. Le polysaccharide (PS), constitué du core et de la chaîne O, fut alors séparé du lipide A par centrifugation. Grâce à un test ELISA sandwich indirect, il a été possible de démontrer que le PS donnait des réponses positives avec les sérums homologues (antisérotype 5) et des réponses négatives avec des sérums hétérologues (sérotype 3 et indéterminé). En résumé, l'utilisation du PS n'a pas sensiblement amélioré la spécificité de l'épreuve ELISA. L'hydrolyse du LC‐LPS et la séparation du PS du lipide A étant laborieuse et complexe, nous ne recommandons pas son utilisation pour le diagnostic sérologique.

High-molecular-mass lipopolysaccharides are involved in Actinobacillus pleuropneumoniae adherence to porcine respiratory tract cells

“…Ten milligrams (dry weight) of LPS was hydrolyzed at 100°C for 2 h in 1 ml of 1% (vol/vol) acetic acid previously saturated with nitrogen. Lipid A (insoluble) and polysaccharides (soluble) were separated by centrifugation at 12,000 x g for 10 min after neutralization with 5 N NaOH (1). Lipid A was washed and resolubilized in 1 ml of EDTA (20 mM) (26).…”

Serological characterisation of Actinobacillus pleuropneumoniae isolated from pigs in 1993 to 1996

“…9,[15][16][17] As neither method could recognise all 12 serovars, it would seem that a combination of both methods may have to be used for definitive serotyping.…”