O presente trabalho teve como objetivo detectar a presença de Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina em bovinos leiteiros da mesorregião central do estado do Espírito Santo, por exames parasitológicos diretos (esfregaço sanguíneo) e sorológicos (Ensaio Imunoabsorção Enzimática - ELISA). Foram colhidas amostras de sangue de 159 bovinos leiteiros provenientes de 6 propriedades rurais, concentradas na mesorregião central do estado do Espírito Santo. O sangue coletado foi armazenado em tubos de EDTA, utilizado para realizar os esfregaços sanguíneos, e em tubos sem anticoagulante, para obtenção do soro. Os soros obtidos foram utilizados para a detecção de anticorpos IgG para A. marginale, B. bovis e B. bigemina. Dos 159 esfregaços sanguíneos analisados, 64 (40,2%) e 11 (6,9%) foram positivos para Anapalsma marginale e Babesia sp., respectivamente. No ELISA das 159 amostras, 9 (5,7%), 59 (37,1%) e 47 (29,5%) foram soropositivas para A. marginale, B. bovis e B. bigemina, respectivamente. Os resultados obtidos, caracterizam as propriedades analisadas da mesorregião central do estado do Espírito Santo, como de instabilidade enzoótica para os agentes da Tristeza Parasitária Bovina (TPB) possuindo alto risco da ocorrência de surtos de anaplasmose e babesiose nestas propriedades.