OBTENÇÃO DE PLANTAS DE LIMÃO CRAVO (Citrus limonia Osbeck) E TANGERINA CLEÓPATRA (Citrus reshni Hort.) A PARTIR DO CULTIVO DE PROTOPLASTOS DE SUSPENSÃO CELULAR

Latado, Rodrigo Rocha; Vaz, F. B. d'Utra; Neto, Augusto Tulmann

doi:10.1590/s0103-90161999000200023

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“…A água de coco fornece açúcares e outros metabólitos para embriões cultivados in vitro; vários trabalhos citam sua utilização no cultivo in vitro de espécies perenes, como os de Ferreira et al (2004) sobre o cupuaçu, e Latado et al (1999) sobre citros. O carvão ativado, quando adicionado ao meio de cultura, possui a capacidade de adsorver substâncias tóxicas liberadas pelos explantes ou impurezas de outros componentes (Grattapaglia & Machado, 1998).…”

Section: Introductionunclassified

Diferentes suplementos no cultivo in vitro de embriões de pinhão-manso

Nunes

Pasqual

Santos

et al. 2008

Pesq. agropec. bras.

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O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do estádio de maturação dos frutos, no desenvolvimento de embriões de pinhão-manso (Jatropha curcas), cultivados em meio MS com diferentes suplementos: sacarose, água de coco e carvão ativado. Os frutos foram coletados, e os embriões de suas sementes extraídos assepticamente. Utilizaram-se duas condições experimentais: embriões oriundos de frutos em três estádios de desenvolvimento (imaturo, maduro e seco), colocados em meio de cultivo MS acrescido de sacarose (0, 15, 30 e 60 g L-1); embriões oriundos de frutos secos, colocados em meio MS acrescido de: 30 g L-1de sacarose, carvão ativado (0, 1, 2 e 3 g L-1) e de água de coco (0, 50, 100, 150, 200 e 250 mL L-1). O material foi mantido por 30 dias em sala de crescimento, sob condições ambientais controladas. Apenas os embriões zigóticos provenientes de frutos imaturos necessitam da suplementação de sacarose para sustentar sua germinação. O melhor desenvolvimento de embriões ocorre em meio MS suplementado com 60 g L-1 de sacarose. A associação de carvão ativado e água de coco proporcionam melhor crescimento de plântulas oriundas de embriões de sementes retiradas de frutos secos.

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Section: Introductionunclassified

Diferentes suplementos no cultivo in vitro de embriões de pinhão-manso

Nunes

Pasqual

Santos

et al. 2008

Pesq. agropec. bras.

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“…O método usado na obtenção de protoplastos foi o mesmo utilizado por Latado et al (1999), com modificações para adequação às fontes de material vegetal utilizado.…”

Section: Methodsunclassified

“…Folhas jovens foram destacadas, cortadas em tiras e colocadas em 4 mL de solução enzimática por 14 a 16 horas, sob agitação de 50 rpm, no escuro e a 27 o C. A solução enzimática usada na obtenção de protoplastos foi a mesma utilizada por Latado et al (1999). A esterilização foi feita por ultrafiltração (0,22 µm).…”

Section: Methodsunclassified

“…Na obtenção de protoplastos, foi utilizado 0,5 g de material em suspensão celular filtrada, adicionada a 4 mL de solução enzimática. Os protoplastos de suspensão celular foram isolados durante oito horas, em condições semelhantes às dos protoplastos de mesofilo foliar, de acordo com Latado et al (1999).…”

Section: Methodsunclassified

“…Plantas regeneradas a partir de suspensões de protoplastos embriogênicos, de origem nucelar, de limão 'Cravo' e tangerina 'Cleópatra' e posteriormente aclimatizadas, foram obtidas por Latado et al (1999).…”

Section: Introductionunclassified

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Obtenção de híbridos somáticos de limão 'Cravo' e tangerina 'Cleópatra'

Latado

Derbyshire

Tsai

et al. 2002

Pesq. agropec. bras.

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Resumo -Este trabalho teve como objetivo a obtenção de híbridos somáticos entre o limão 'Cravo' (Citrus limonia Osbeck) e a tangerina 'Cleópatra' (Citrus reshni Hort.), para serem usados como portaenxertos de citros. O limão 'Cravo' é atualmente o principal porta-enxerto comercial utilizado no Brasil, em virtude de suas boas qualidades agronômicas. Entretanto, é suscetível ao "declínio" dos citros, doença responsável pela eliminação anual de milhões de plantas cítricas no Brasil. A tangerina 'Cleópatra' é uma espécie bastante utilizada como porta-enxerto em outros países e tem sido descrita na literatura como tolerante ao "declínio". Protoplastos de suspensões celulares embriogênicas e protoplastos derivados de tecidos foliares foram utilizados para fusão com solução de PEG (50%) e posterior cultivo em agarose. A porcentagem de obtenção de células híbridas interespecíficas logo após a fusão, variou entre 5,1% e 6,8%. Foram obtidas mais de 500 plantas a partir de produtos de fusão cultivados em gotas de agarose. No total de 180 plantas avaliadas, 11 híbridos somáticos foram discriminados e confirmados, utilizando-se marcadores moleculares RAPD e isoenzimáticos (sistemas PO, IDH e PGI). Seis plantas foram aclimatizadas, plantadas no solo e estão sendo multiplicadas por estaquia para avaliação futura como porta-enxertos de citros.Termos de indexação: protoplastos, marcador genético, polimorfismo genético, porta-enxerto, citros. Somatic hybridization between 'Rangpur' lime and 'Cleópatra' mandarinAbstract -The aim of this work was to obtain somatic hybrids between 'Rangpur' lime (Citrus limonia Osbeck) and 'Cleópatra' mandarin (Citrus reshni Hort.), to be used as a citrus rootstock. 'Rangpur' lime is the most important Brazilian citrus rootstock due to its higher horticultural performance. Nevertheless, this species is susceptible to blight disease, which is responsible for the death of millions of productive trees per year in Brazil. 'Cleópatra' mandarin has become an increasingly important rootstock in other countries and has been reported as being tolerant to citrus blight disease. Leaf protoplasts and protoplasts from embryogenic cell suspension cultures were fused using PEG solution (50%) and further cultivation in agarose. The frequency of heterokaryon formation was 5.1% to 6.8%. More than 500 plants were regenerated from these fusion experiments and 180 were tested. Among them, 11 plants were confirmed to be a somatic hybrid by means of molecular markers (RAPD) and isoenzymes markers (PO, IDH and PGI systems). Six plants were acclimatized, planted in the soil and have been multiplied by cuttings in order to evaluate their potential as citrus rootstocks.

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Fusão de protoplastos visando a reconstrução da laranja azeda

Carvalho¹

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PROTOPLAST FUSION AIMING THE RECONSTRUCTION OF SOUR ORANGE The aim of this work was to apply the technique of chemical fusion of protoplasts, in order to develop interspecific somatic hybrids between mandarins (Citrus reticulata) and pummelos (Citrus grandis), in order to produce similar to sour orange (Citrus aurantium). The sources for protoplasts were embryogenic suspension cultures of 'Page' tangelo (C. reticulata x C. paradisi) and 'Murcott' tangor (C. reticulata x C. sinensis) and young leaves from seedlings of 'Lau Tau' and 'Ogami' pummelos (Citrus grandis). After the fusion, the protoplasts were cultivated in the absence of light, until the formation of microcolonies, and were then cultivated in double-phase EME medium, supplemented with 13.33 g/L of maltose for embryogenesis induction. The globular embryos thus formed were transferred to EME medium with 25 g/L of sucrose and, when in cotyledonal stage, were transferred to a culture medium supplemented with 1.5 g/L of malt extract. The shoots obtained were grafted in vitro onto 'Hamlin' and 'Valencia' sweet oranges. The regenerated plants were cultivated in a greenhouse, over commercial substrate. In this process, 17 plants were obtained. These plants presented phenotypic conformation different from the genitors, with leaves with reduced size, round apex, dark green coloration, rough leaf blade and absence of developed petiole. The analysis by flow cytometry confirmed the diploid character of the regenerated plants. RAPD molecular markers presented a similar band pattern between the regenerated specimen and the genitor 'Page' tangelo. The protocol used for isolation, hybridization and cultivation of protoplasts, as well as for the regeneration and acclimatization of the plants allowed the obtainment of 17 plants from the combination of 'Page' tangelo + 'Lau Tau' pummelo, with phenotypic conformation different from the genitors, two plants from the combination of 'Murcott' tangor + 'Ogami' pummelo and one plant from the combination of Murcote' tangor + 'Lau Tau' pummelo.

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OBTENÇÃO DE PLANTAS DE LIMÃO CRAVO (Citrus limonia Osbeck) E TANGERINA CLEÓPATRA (Citrus reshni Hort.) A PARTIR DO CULTIVO DE PROTOPLASTOS DE SUSPENSÃO CELULAR

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