Criopreservação de espermatozóides eqüinos comparando duas curvas de congelamento combinadas com diluentes comerciais: uma análise laboratorial

Terraciano, Paula Barros; Bustamante‐Filho, Ivan Cunha; Miquelito, Ludmila do Vale; Arlas, T.R.; Castro, Fabiana Santos; Mattos, Rodrigo Costa; Passos, Eduardo Pandolfi; Oberst, Eneder Rosana; Lima, Elizabeth Obino Cirne

doi:10.1590/s0103-84782008000700027

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“…Ao avaliarem diferentes crioprotetores, para a criopreservação do ejaculado de 20 garanhões de diferentes raças, Medeiros et al (8) observaram 27% de células móveis pós-descongelamento para o diluente contendo glicerol e 52% naquele com dimetilformamida (P<0,05). Para a criopreservação de espermatozoides de 55 garanhões de diferentes raças com diluentes contendo 5% de glicerol ou 5% de dimetilformamida como crioprotetores, Alvarenga et al (9) verificaram motilidade progressiva superior com a (10) demonstraram que diluentes à base de amidas são mais eficazes na proteção aos espermatozoides, resultando em motilidade progressiva pós-descongelamento superior quando comparado aos que contém apenas glicerol (FR5). Candeias et al (11) , ao avaliarem três meios de criopreservação, dois deles com 4% de glicerol e outro com 1% de glicerol e 4% de metilformamida, obtiveram efeitos superiores de motilidade total para este último.…”

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“…Pace e Sullivan (16) verificaram que o glicerol em concentrações superiores a 3%, ou quando usado de forma isolada em concentrações superiores a 5%, exerce efeito tóxico sobre o espermatozoide equino, fato esse evidenciado para garanhões de raças consideradas de baixa congelabilidade, como o Mangalarga Marchador e outras raças nacionais (3,8,11,12) . Os resultados superiores de integridade das membranas plasmática e acrossomais encontrados neste experimento com os diluentes contendo metilformamida corroboram os resultados de Terraciano et al (10) e Medeiros (17) ; contudo, Alvarenga et al (9) , Candeias et al (11) e Ferreira (18) não observaram diferenças na preservação da integridade de membrana quando compararam protocolos de criopreservação com glicerol e amidas. Neste experimento, quando se utilizou apenas o glicerol como crioprotetor (FR5), o resultado de motilidade total pós-descongelamento foi 30%, enquanto para concentrações de 1 ou 2% de glicerol, em combinação com a metilformamida e dimetilformamida (Botucrio e FR6), a motilidade foi superior a 30%, dados semelhantes aos encontrados por Candeias et al (11) e Oliveira et al (12) .…”

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Utilização De Diferentes Diluentes Na Criopreservação De Espermatozoides De Garanhões Mangalarga Marchador

Nascimento

Blume

Oliveira³

et al. 2015

Ciênc. anim. bras.

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ResumoAs biotécnicas aplicadas à reprodução animal como inseminação artificial, transferência e produção in vitro de embriões, indução e sincronização de cio e congelamento de gametas vêm sendo cada vez mais utilizadas na prática veterinária. No entanto, algumas biotécnicas ainda não alcançaram o seu total aperfeiçoamento técnico na reprodução equina, como a criopreservação de sêmen. Objetivou-se avaliar as características pós-descongelamento (motilidade total, vigor e integridade de membrana plasmática e acrosomal) dos espermatozoides de garanhões da raça Mangalarga Marchador (n=5), empregando-se três diluentes de criopreservação. Após a colheita, o sêmen foi diluído na proporção de 1:1 em meio à base de leite em pó desnatado e centrifugado a 600 G por 10 minutos. Após a centrifugação, o sobrenadante foi desprezado e o pellet obtido dividido e ressuspendido com Botucrio, FR5 ou FR6. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL sendo a concentração ajustada para 200x10 6 espermatozoides/mL. As palhetas foram distribuídas em uma plataforma-suporte e estabilizadas a 5 ºC/60 min., em refrigerador comercial. Para o congelamento, as palhetas, posicionadas horizontalmente, foram expostas por 15 minutos ao vapor de nitrogênio líquido, em uma caixa de isopor, a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido. Logo em seguida, as palhetas foram imersas no nitrogênio líquido, acondicionadas em raques e estocadas em botijão criogênico a -196 ºC, para posterior avaliação. Não houve diferença para as variáveis motilidade, vigor e integridade das membranas plasmática e acrossomais quando se utilizaram diluentes que contêm a associação de amidas e glicerol (Botucrio e FR6; P>0,05). As variáveis seminais no diluente contendo apenas glicerol foram inferiores em todas as avaliações (P<0,05). A utilização de crioprotetores como a metilformamida, em associação com concentrações de 1 ou 2%

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Utilização De Diferentes Diluentes Na Criopreservação De Espermatozoides De Garanhões Mangalarga Marchador

Nascimento

Blume

Oliveira³

et al. 2015

Ciênc. anim. bras.

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Eficiência dos diluidores Tris e Botu-crio® sobre os parâmetros seminais de garanhões das raças quarto de milha e mangalarga marchador

et al. 2014

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O principal fator a limitar o processo de criopreservação de sêmen equino está relacionado à própria espécie, por apresentar uma grande variabilidade nas características dos ejaculados pós-descongelação. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a viabilidade espermática pós-descongelação, do sêmen de garanhões das raças Quarto de Milha e Mangalarga Marchador utilizando-se dois diluentes (Tris e Botu-crio®) na criopreservação. Para tanto, foram analisadas as características físicas do sêmen fresco, funcionalidade da membrana espermática pelo Teste Hiposmótico (HOST), motilidade total e vigor pelo Teste de Termoresistência (TTR), motilidade progressiva pelo sistema computadorizado CASA (Computer Assisted Sêmen Anlyses) e integridade da membrana espermática, do acrossoma e funcionalidade de mitocôndria por microscopia de epifluorescência. O diluente Botu-crio® preservou melhor os valores de motilidade e vigor e a integridade de membrana plasmática, pós-descongelamento. Não houve diferença significativa entre as raças quanto à motilidade total e vigor no sêmen fresco, bem como para a análise desses parâmetros no Teste de Termoresistência pós-descongelamento. Garanhões da raça Quarto de Milha apresentaram percentual maior de defeitos maiores na análise de patologia espermática.

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Criopreservação de espermatozóides eqüinos comparando duas curvas de congelamento combinadas com diluentes comerciais: uma análise laboratorial

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Utilização De Diferentes Diluentes Na Criopreservação De Espermatozoides De Garanhões Mangalarga Marchador

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