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ResumoAs biotécnicas aplicadas à reprodução animal como inseminação artificial, transferência e produção in vitro de embriões, indução e sincronização de cio e congelamento de gametas vêm sendo cada vez mais utilizadas na prática veterinária. No entanto, algumas biotécnicas ainda não alcançaram o seu total aperfeiçoamento técnico na reprodução equina, como a criopreservação de sêmen. Objetivou-se avaliar as características pós-descongelamento (motilidade total, vigor e integridade de membrana plasmática e acrosomal) dos espermatozoides de garanhões da raça Mangalarga Marchador (n=5), empregando-se três diluentes de criopreservação. Após a colheita, o sêmen foi diluído na proporção de 1:1 em meio à base de leite em pó desnatado e centrifugado a 600 G por 10 minutos. Após a centrifugação, o sobrenadante foi desprezado e o pellet obtido dividido e ressuspendido com Botucrio, FR5 ou FR6. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL sendo a concentração ajustada para 200x10 6 espermatozoides/mL. As palhetas foram distribuídas em uma plataforma-suporte e estabilizadas a 5 ºC/60 min., em refrigerador comercial. Para o congelamento, as palhetas, posicionadas horizontalmente, foram expostas por 15 minutos ao vapor de nitrogênio líquido, em uma caixa de isopor, a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido. Logo em seguida, as palhetas foram imersas no nitrogênio líquido, acondicionadas em raques e estocadas em botijão criogênico a -196 ºC, para posterior avaliação. Não houve diferença para as variáveis motilidade, vigor e integridade das membranas plasmática e acrossomais quando se utilizaram diluentes que contêm a associação de amidas e glicerol (Botucrio e FR6; P>0,05). As variáveis seminais no diluente contendo apenas glicerol foram inferiores em todas as avaliações (P<0,05). A utilização de crioprotetores como a metilformamida, em associação com concentrações de 1 ou 2%

A indústria do cavalo movimenta, no Brasil, aproximadamente R$16 bilhões de reaispor ano e gera 610 mil empregos diretos e indiretos. A demanda direcionada aos sistemasde criação viabilizou o desenvolvimento de biotécnicas que permitissem um maior e melhorpotencial produtivo e reprodutivo de várias espécies. Entretanto, o sêmen equino congeladoe descongelado apresenta, relativamente, baixas taxas de fertilidade. Isso ocorre devido aosdanos causados pela criopreservação dos gametas masculinos que fazem com que ocorraredução da longevidade espermática. Nesse contexto, técnicas foram criadas com o objetivode amenizar esses danos, tal como a separação do líquido seminal. A centrifugação efiltração aumentam a concentração por meio da retirada do líquido seminal, porém, podemcausar danos à sua viabilidade. Sendo assim, objetivou-se com esse estudo avaliar osprocedimentos de filtração e centrifugação dos espermatozoides congelados edescongelados, avaliando a longevidade das células pela observação das alterações dosaspectos físicos durante a incubação por até 90 minutos. Foram utilizadas partidas doesperma congelado de 10 equinos que foram divididas em 3 grupos: controle (CT),Centrífuga e Sperm Filter. O grupo controle não foi submetido a nenhum processo deseparação mas apenas às análises de motilidade, vigor e contagem de células commembrana íntegra, nos cinco diferentes tempos (T0= 0 minuto, T20= 20 minutos, T40= 40minutos, T60= 60 minutos e T90= 90 minutos) do Teste de Termorresistência (TTR). O grupoCentrífuga foi submetido à centrifugação por 10 minutos a 600 gravitacionais, ressuspendidoem meio crioprotetor com glicerol e analisado durante os cinco diferentes tempos do TTR. Ogrupo Sperm Filter foi submetido à filtração através da membrana hidrofílica sintética eressuspendido em meio crioprotetor com glicerol e analisado nos diferentes tempos do TTR.Nos 3 grupos foram analisados a motilidade total, vigor espermático e contagem de célulascom membrana íntegra. A análise dos dados foi feita utilizando ANOVA com teste de Tukeypara motilidade e contagem de células com membrana íntegra e Kruskal-Wallis para o vigor.Os resultados indicaram que a filtração espermática com auxílio da membrana hidrofílicasintética tendeu a conservar melhor a motilidade espermática nos dois primeiros momentos(T0: P= 0,082; T20: P= 0,088). Contudo, nas seguintes avaliações, percebeu-se uma variaçãona motilidade dos grupos (T40: 21,5 ± 6,402; T60= 16,33 ± 5,188; T90= 12,00 ± 4,719) e não diferiu entre eles (P0,05). Observou-se também que, com sêmen congelado, o grupoCentrífuga selecionou espermatozoides mais íntegros no primeiro momento (T0), emcomparação com o grupo Sperm Filter. Contudo, mais estudos devem ser feitos com oobjetivo de elucidar por quais motivos o grupo Centrífuga foi mais eficaz aos demais gruposcom relação aos demais grupos, no primeiro momento depois de descongelados.

Summary This study compares a commercial semen extender (control group) to ultra high temperature (UHT) skimmed milk (treatment group) used during centrifugation for subsequent cryopreservation of equine semen. Following post‐thawing of semen samples parameters measured included motility, sperm motion kinetics (using computerised assisted semen analysis) as well as acrosome and plasmatic membrane integrity (using fluorescent dyes). After collection and analysis, the sperm‐rich fraction was divided and diluted with either: control (1:1 dilution in a skimmed milk‐glucose extender) or treatment (1:1 dilution in UHT skimmed milk). The milk used in this experiment was of the same source, commercial brand, of only one lot. After dilution, samples were subjected to centrifugation at 600 g for 10 min and sperm pellets were resuspended in a freezing extender to a concentration of 200 × 106 cells/ml. Aliquots were packed into 0.5 ml straws placed in a stainless steel support and kept inside the refrigerator (5°C) for 20 min. Subsequently, these straws were placed at a height of 6 cm over liquid nitrogen for 20 min in an isotherm box. No significant differences were observed in total sperm motility (42.71 vs. 38.29%), progressive sperm motility (12.29 vs. 7.86%), plasma membrane integrity (53.43 vs. 60.14%) or acrosomal membrane integrity (93.29 vs. 93.71%) with a P>0.05 calculated between the control and the treatment groups, respectively. Considering that UHT skimmed milk has a lower cost than the commercial semen extender, this could be an option used during the centrifugation protocol to decrease the expense of the equine semen cryopreservation process and increase shelf life.

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