O presente trabalho foi conduzido no Departamento de Engenharia de Biossistemas da ESALQ/USP, durante o período de agosto a setembro de 2013. O experimento avaliou três tipos de substratos (areia lavada, fibra de coco e substrato Plantmax®) e cinco diferentes concentrações de ácido indolbutírico (AIB - 0, 500, 1000, 2000 e 4000 mg L-1). O delineamento experimental adotado foi o fatorial inteiramente aleatorizado 3 x 5, com quatro repetições. Os efeitos principais da interação multiplicativa, modelo AMMI, do substrato (S) e AIB (A) foram utilizados para analisar as variáveis biométricas. Os fatores substrato (S) e a interação S x A foram significativos para massa seca de folhas e raízes, comprimento radicular, diâmetro do caule, razão diâmetro-altura e índice de qualidade de Dickson. O teste de Gollob apresentou um componente principal significativo (IPCA1). A estaquia de Ocimum basilicum L. pode ser realizada tanto por substrato Plantmax® sem tratamento de ácido indolbutírico, como pelo substrato areia lavada com o tratamento de ácido indolbutírico na concentração de 2000 mg L-1.