Caracterização molecular parcial do gene gag de amostras do vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) isoladas de animais naturalmente infectados no Rio Grande do Sul, Brasil

Marchesin, Denise Medina; Moojen, Valeria; Ravazzolo, Ana Paula

doi:10.1590/s0100-736x1998000300006

Cited by 8 publications

(7 citation statements)

References 30 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…A escolha de "primers" degenerados teve como objetivo detectar o maior número possível de amostras, uma vez que eles foram desenhados a partir do alinhamento de cinco seqüências de SRLV disponíveis no Genbank. A confirmação da especificidade dos "primers" foi realizada em trabalho anterior, no qual foram amplificados fragmentos a partir de isolados e clone de DNA proviral (Marchesin et al, 1998). Os fragmentos então obtidos foram igualmente submetidos à hibridização -"Southern blot" -com sonda específica (Marchesin, 1997 No segundo teste, com soro controle anti-p28, todos as amostras de soro foram negativas.…”

Section: Resultsunclassified

“…A PCR foi realizada conforme descrito anteriormente (A enzima Taq DNA polimerase foi cedida pelo Laboratório CENBIOT Enzimas -Centro de Biotecnologia -UFRGS) (Marchesin et al, 1998), com modificações. As seqüências dos "primers" degenerados específicos para o gene gag, bem como sua posição na seqüência do provírus CAEV-CORK (Saltarelli et al, 1990), são apresentados na Tab.…”

Section: Methodsunclassified

See 1 more Smart Citation

Detecção da infecção pelo vírus da artrite-encefalite caprina: imunodifusão em ágar e reação em cadeia da polimerase com "primers" degenerados

Rutkoski¹,

Werenicz

Reischak³

et al. 2001

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

View full text Add to dashboard Cite

O objetivo deste trabalho foi analisar amostras de soro e de células sangüíneas de caprinos para detecção de anticorpos e DNA proviral do vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV), respectivamente. Utilizou-se a técnica de imunodifusão em ágar (AGID) e a reação em cadeia da polimerase (PCR) com "primers" degenerados. Foram analisadas amostras de diferentes procedências: 39 de Mato Grosso do Sul (MS), 19 de São Paulo (SP) e 22 do Ceará (CE), dessas últimas, 12 oriundas de animais importados do Canadá. Os resultados de AGID e PCR foram discordantes, pois o primeiro permitiu a detecção de 25 animais soropositivos, enquanto a PCR detectou DNA proviral de CAEV em 16 amostras. Pela PCR foi possível identificar animais infectados cujos testes sorológicos foram negativos pelo AGID: oito amostras do MS e um do CE. São discutidos diferentes aspectos que poderiam estar envolvidos na discordância dos resultados.

show abstract

Section: Resultsunclassified

Section: Methodsunclassified

Detecção da infecção pelo vírus da artrite-encefalite caprina: imunodifusão em ágar e reação em cadeia da polimerase com "primers" degenerados

Rutkoski¹,

Werenicz

Reischak³

et al. 2001

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Diferentes amostras de LVPR têm sido isoladas e caracterizadas em diversos estados brasileiros (Marchesin et al, 1998;Castro et al, 1999;Ravazzolo et al, 2001). A caracterização molecular dessas amostras é importante para evidenciar a diversidade de propriedades biológicas dos vírus que podem redundar em diferenças de citopatogenicidade tanto in vivo quanto in vitro, e de manifestação clínica da doença, além de auxiliar o desenvolvimento de métodos de diagnóstico mais sensíveis.…”

Section: Introductionunclassified

Vírus da artrite encefalite caprina: isolamento e caracterização de parte do gene gag

Lima

Rocha

Stancek

et al. 2004

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

View full text Add to dashboard Cite

RESUMOAmostras de sangue de 12 animais soropositivos pelo teste de imunodifusão em gel de agarose e que não apresentavam sinais clínicos sugestivos de infecção pelo vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) foram coletadas para isolamento viral. Mácrofagos derivados de monócitos foram co-cultivados com células de membrana sinovial caprina (MSC), resultando em cinco amostras que apresentaram efeito citopático característico do tipo persistente, semelhante ao observado para o CAEV. Uma técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) foi padronizada para amplificar parte do gene gag do genoma pró-viral, codificante para a proteína do capsídeo viral (p25). As cinco amostras foram amplificadas pela PCR e três delas, BR-UFMG/PL1, BR-UFMG/PL2 e BR-UFMG/PL3, foram seqüenciadas diretamente dos seus produtos de PCR. O alinhamento múltiplo das seqüências obtidas com outras de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR), obtidas no GenBank, e o dendrograma revelaram que as novas amostras de CAEV são únicas e distintas das demais amostras de LVPR, possuindo maior identidade de nucleotídeos e aminoácidos entre si e com as amostras de CAEV do que com a do vírus maedi-visna.Palavras-chave: vírus da artrite-encefalite caprina, isolamento, PCR, análise filogenética ABSTRACT Blood samples from 12 seropositive animals by agar gel immunodifusion test (AGID) showing no evident clinical signs of disease were taken to attempt caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) isolation. Monocyte-derived macrophages were co-cultured with goat synovial membrane cells (GSM) resulting in five virus isolations, which presented cytophatic effects of the persistent type, resembling those observed for CAEV. A polymerase chain reaction (PCR) assay was designed to amplify a portion of the gag proviral gene coding for the major core protein (p25). All of the five isolates were amplified by this PCR and three of them named BR-UFMG/PL1, BR-UFMG/PL2 and BR-UFMG

show abstract

“…No entanto, estes testes podem ter sua sensibilidade afetada por algumas das características das infecções por lentívirus, o que têm implicação direta no sucesso ou não dos programas de controle (Hanson et al 1996). Em virtude da grande variabilidade genômica e antigênica dos isolados de SRLV (Rosati et al 1995, Leroux et al 1997, Marchesin et al 1998, Zanoni 1998, Ravazzolo et al 2001) faz-se necessário que sejam desenvolvidas técnicas sensíveis e específi-cas para o diagnóstico. Dentro destes preceitos, o uso de antígenos produzidos com isolados autóctones seria indicado, o que reduziria o número de resultados falso-negativos.…”

Section: Introdução Introdução Introdução Introdução Introduçãounclassified

Imunofluorescência utilizando isolados brasileiros no diagnóstico sorológico de infecção por lentivírus em caprinos

2002

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

Small ruminant lentiviruses (SRLV) are distributed worldwide and cause persistent infections in sheep and goats. The purpose of this work was to develop an indirect immunofluorescent antibody (IFA) test using Brazilian SRLV isolates for serological diagnosis of infection in goats. The IFA test was compared in its sensitivity and specificity to the AGID test in which Maedi-Visna WLC-1 strain was used as antigen. Ovine synovial secondary cell cultures infected with two goat SRLV isolates (CAEV UFRGS/Br-2 and CAEV UFRGS/Br-5) were used for the IFA. Goat serum samples (n = 239) were tested by the two tests. The AGID test detected antibodies in 129 (53.9%) serum samples. A higher number of animals was considered positive for the IFA. However, different results were obtained depending on the isolate used for the antigen preparation. When CAEV UFRGS/Br-2 was used as antigen, 216 (90.3%) serum samples tested positive, against 213 (89.1%) with CAEV UFRGS/Br-5. There was no significant statistical difference between the antigens prepared with these two isolates. The IFA had sensitivity of 94.6% and 96.9%, and specificity of 14.5 % and 20%, when CAEV UFRGS/Br-2 and CAEV UFRGS/Br-5 were used as antigens, respectively. These results demonstrate that the IFA with antigens prepared with Brazilian SRLV isolates may play an important a role as a complementary serological test for the diagnosis of infections by these agents.INDEX TERMS: Small ruminant lentiviruses, Brazilian isolates, diagnosis, indirect immunofluorescence, immunodiffusion, goats.

show abstract

Caracterização molecular parcial do gene gag de amostras do vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) isoladas de animais naturalmente infectados no Rio Grande do Sul, Brasil

Cited by 8 publications

References 30 publications

Detecção da infecção pelo vírus da artrite-encefalite caprina: imunodifusão em ágar e reação em cadeia da polimerase com "primers" degenerados

Detecção da infecção pelo vírus da artrite-encefalite caprina: imunodifusão em ágar e reação em cadeia da polimerase com "primers" degenerados

Vírus da artrite encefalite caprina: isolamento e caracterização de parte do gene gag

Imunofluorescência utilizando isolados brasileiros no diagnóstico sorológico de infecção por lentivírus em caprinos

Contact Info

Product

Resources

About