Bidens mosaic virus: detecção via RT-PCR e identificação de Galinsoga parviflora como um novo hospedeiro natural do vírus

Abstract

(1,4,6) e alface (3). Por meio de análises na região codificadora da proteína capsidial de um isolado de BiMV proveniente de ervilha e outro de picão, foi proposto recentemente que o BiMV poderia ser uma estirpe do Potato virus Y, PVY(5).Apesar de já ter sido relatado há algum tempo em alface (3) é um vírus pouco estudado na cultura, principalmente pela falta de um teste de detecção eficiente para o vírus. Antissoro contra um isolado de BiMV proveniente de alface já foi produzido, porém em PTA-ELISA a sensibilidade de detecção do vírus a partir de alface foi baixa, tendo sido somente boa a partir de plantas de Chenopodium quinoa infectadas pelo vírus (9). Em alface o vírus causa sintomas semelhantes ao Lettuce mosaic virus (LMV) e Lettuce mottle virus (LeMoV), sendo difícil sua identificação por meio de métodos biológicos (8).Na ausência de métodos moleculares de diagnose para o BiMV, o objetivo deste trabalho foi a elaboração de oligonucleotídeos específicos para este vírus e sua otimização em testes de RT-PCR em uma só etapa. Para extração do RNA total utilizou-se o método de Bertheau et al. (2). Os oligonucleotídeos foram desenhados a partir da sequência anteriormente obtida de alface (8) e de outras depositadas no Gen Bank provenientes de ervilha e B. pilosa (5). As sequências foram analisadas pelo programa BLAST n (www.ncbi.nlm.gov/ blast/) e Mega versão 3.1 (7).Os oligonucleotídeos obtidos foram denominados 8851sens (5'AGG CAG TTC GCA CGG CAT AC 3´) e 9211ant (5´ CTT CAT CTG GAT GTG TGC TTC 3´) e amplificaram eficientemente o fragmento de 360 bp (Figura 1), a partir de amostras de alface, picão preto e Galinsoga parviflova através de RT-PCR em uma única etapa utilizando-se o Kit PCR Master Mix (Promega). Para um volume de 25l adicionou-se: 12,5l de PCR Master Mix 2X, 100 M de cada oligonucleotídeo, 1 unidade da transcriptase reversa AMV (Promega a 15 unidades/ L), 2,5l de RNA e água livre de RNAses para completar o volume de 25l. O ciclo utilizado ABSTRACTBidens mosaic virus (BiMV) is a tentative species of the genus Potyvirus and infects lettuce (Lactuca sativa). In the absence of efficient methods for the diagnosis of the virus, the objective of this work was to develop specifics primers for a one-step RT-PCR test using total RNA.

Biological and molecular characterisation of Bidens mosaic virus supports its assignment as a member of a distinct species in the genus Potyvirus

“…Bidens mosaic virus (BiMV) was described in 1961 [1] as a virus causing mosaic symptoms in Bidens pilosa L. and belonging to the genus Potyvirus. This virus is apparently restricted to Brazil and was reported to naturally infect B. pilosa, Helianthus annuus [2], Coreopsis lanceolata [3], Pisum sativum [4], Lactuca sativa [5], and Galingsoga parviflora [6]. Although BiMV was initially considered a separate potyvirus [1][2][3][4][5], it is currently classified as a strain of potato virus Y (PVY) [7] based on its coat protein (CP) gene sequence [8].…”

“…The virus did not infect Amaranthus viridis, Capsicum annum ''Magda'', Chenopodium murale, Datura metel, D. stramonium, Solanum lycopersicum ''Santa Clara'', Nicandra physaloides, Nicotiana glutinosa, Petunia hybrida, Physalis floridana and Sonchus oleraceus. From symptomatic and symptomless plants, total RNA was extracted as described previously, and the presence of BiMV was verified by RT-PCR [6].…”