Métodos imunoquímicos para análise de contaminantes ambientais: conceitos, estado da arte e perspectivas

Abstract

Recebido em 6/2/04; aceito em 20/10/04; publicado na web em 28/2/05 IMMUNOCHEMICAL METHODS FOR ANALYSIS OF ENVIRONMENTAL CONTAMINANTS: CONCEPTS, STATE OF THE ART AND PERPECTIVES. Immunoassay techniques provide simple, powerful and inexpensive methods for analysis of environmental contaminants. However, the acceptance of immunoassays is dependent on the clear demonstration of quality and validity compared to more traditional techniques. In this review, primarily, the understanding and the fundamentals of immunoassay methods are given in order to make good use of immunoassays, especially of EIA tests. Special attention is given to the concepts related to the enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) formats, such as inhibition concentration at 50% (IC 50 ), detection limit (LOD), cross-reactivity (CR %). It is also explained why some immunoassays are quantitative methods whereas others can only be used as screening methods. A list of main commercial kits for detection of priority pollutants is given in order to help analysts. Others formats, such as flowinjection immunoassay analysis (FIIA), immunoassay chromatography and immunosensors are also cited.Keywords: immunoassays; environmental contaminants; monitoring. INTRODUÇÃOA origem dos métodos imunológicos situa-se no final da déca-da de 50, quando Yalow e Berson 1 descreveram o primeiro ensaio imunológico para detectar insulina humana, o que lhes rendeu o Prêmio Nobel em 1977. A partir de então, as técnicas imunoquí-micas foram desenvolvidas como métodos de análise de macromoléculas (enzimas, hormônios), e posteriormente para moléculas orgânicas pequenas (drogas, fármacos), tendo seu maior êxito no campo da química clínica 2-4 . Em meados da década de 70, foi desenvolvido o primeiro ensaio biológico para pesticidas (aldrin e dieldrin) 5 . A este ensaio, seguiram-se outros, também baseados na marcação radioativa, chamados ensaios radioimunológicos ("radioimmunoassay, RIA"). Os ensaios imunoenzimáticos ("enzyme immunoassay, EIA") surgiram na década de 60 para identificação e localização de antígenos em preparações histológicas 2,6,7 , tendo sido a sua utilidade reconhecida posteriormente em outros campos distintos [8][9][10][11][12][13] . No início dos anos 80, começou-se a discutir as possibilidades que estes tipos de métodos analíticos podiam oferecer na detecção de contaminantes, tanto em amostras ambientais como de alimentos 12,14-16 , o que fomentou a sua aplicação no campo da química ambiental. A partir desse momento, começou-se a utilizar a marcação enzimática, que proporcionava menores riscos e apresentava sensibilidade similar aos métodos convencionais de análise 12,[15][16][17][18][19] . Inúmeras vantagens podem ser obtidas com a utilização dos métodos imunoquímicos e, paulatinamente, vão sendo disponibilizadas informações sobre diversos aspectos analíticos, tais como i) interpretação dos dados obtidos no desenvolvimento dos métodos; ii) estratégias utilizadas para a garantia da qualidade dos procedimentos operacionais; iii) análise dos dados e das informa...

Avaliação Da Contaminação De Corpos D’água Adjacentes a Áreas Agrícolas Da Ilha De São Luís (Ma) Por Agrotóxicos

“…As coletas das amostras de águas e sedimentos seguiram os protocolos descritos pela Agência Americana de Proteção Ambiental (US-EPA, 2007) com pequena modifi cação: as amostras de água destinadas aos testes imunoquímicos não foram preservadas em ácido para que não ocorresse alteração nos resultados, devido diminuição drástica do pH. Tais amostras foram tratadas no máximo 24 horas após a coleta, a fi m de evitar a degradação dos princípios ativos presentes (NUNES, 2005). As amostras destinadas às análises cromatográfi cas foram preservadas gotejando-se, logo após a coleta, ácido sulfúrico concentrado até se obter valor de pH <2,0 (US-EPA, 2007).…”

"Padronização e desenvolvimento de reagentes imunoenzimáticos para pesquisa de ciprofloxacina em produtos de origem animal"

“…Os (Nunes, 2005). Devido à sua alta especificidade, anticorpos vêm sendo utilizados para purificar, classificar, identificar e quantificar substâncias (Trione, 1988).…”

“…A padronização de um ensaio imunoenzimático é muito laboriosa, pois para que se tenha sucesso nesse trabalho, devem-se levar em conta três etapas fundamentais: a síntese dos haptenos, o preparo dos imunógenos e a imunização em animais de laboratórios. Esses fatores acabam-se tornando a chave para o sucesso quando se visa à produção e a padronização de anticorpos (Nunes, 2005).…”

“…A concentração da ciprofloxacina conjugada com a peroxidase preparada in house utilizada para esse teste foi de 1/400 e do leite fortificado foi de: 0 μg/ml, 1 μg/ml, 0,5 μg/ml e 0,1 ug/ml.Os dados obtidos da padronização desse teste foram posteriormente analisados e correlacionados com o kit referência RIDASCREEN Enro/Cipro da R-Preparo do antígeno O sistema imune é capaz de responder a um determinado antígeno através da atuação e interação entre células apresentadoras de antígenos, linfócitos B e linfócitos T. Quando essas macromoléculas estranhas entram em contato com o sistema imune, estes as reconhecem e reagem contra elas. Nesta situação, o antígeno é denominado imunógeno, havendo a produção de anticorpos pelos linfócitos B, ativação de linfócitos T e geração de células de memória, cuja função será eliminar ou conter a disseminação do antígeno.Apenas as regiões mais polares e expostas da molécula de antígeno são capazes de estimular a formação de anticorpos pelos linfócitos B. Essas porções mais superficiais são denominadas determinantes antigênicos ou epítopos, e interagem com o sítio de ligação do anticorpo(Nunes, 2005). Essas interações são mantidas por forças fracas, iguais as que mantêm o complexo enzima-substrato, denominadas por forças iônicas, pontes de hidrogênio, ligações de Van der Waals e hidrofóbicas.…”

Padronização de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para detecção de anticorpos anti-eCG em ratas

“…A partir da observação da adsorção do antígeno e do anticorpo em uma superfície sólida e da capacidade de realizar ligações específicas de alta afinidade, foram desenvolvidos os primeiros testes imunoenzimáticos ou Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) no final da década de 1960 (NUNES, 2005). Anteriormente, os testes imunológicos eram realizados com a técnica de radioimunoensaio (RIA), porém, essa técnica se mostrava ineficiente para o processo de adsorção de alguns antígenos tanto livres quanto ligados.…”