Padronização de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para detecção de anticorpos anti-eCG em ratas

Abstract

A potência biológica da gonadotrofina coriônica equina (eCG) é estimada, sob condições controladas, a partir do seu efeito sobre a massa dos ovários de ratas imaturas mediante a comparação com o efeito de um agente padrão e com um grupo controle. O aumento de massa ovariana mediante uso da eCG ocorre devido à superovulação induzida em função do efeito agonista da molécula, já que essa apresenta reconhecida capacidade de se ligar aos receptores de hormônio luteinizante (LH) e hormônio folículo estimulante (FSH). O objetivo do presente estudo foi a padronização de uma concentração ótima do formulado de eCG (Padrão internacional PMSG – NZY02) em diferentes concentrações do teste de imunodiagnóstico ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) para a detecção da produção de anticorpos anti-eCG em ratas imaturas submetidas a protocolos de superovulação. Foram utilizadas 80 ratas (Rattus norvegicus), com diferença de peso entre os animais de no máximo 10 g, que foram distribuídos de forma aleatória em 4 tipos de tratamento (inoculação do formulado padrão internacional PMSG 11,57 UI/mL, 17,34 UI/mL, 26 UI/mL e solução salina. O sangue dos animais foi colhido nos momentos D5, D21 e D28 após a primeira inoculação (D0) e os ovários foram coletados para pesagem nos momentos D5 e D28. O ensaio experimental foi conduzido no Biotério da empresa Ourofino, localizado no Centro Pesquisa Veterinária (CPV), na cidade de Guatapará – SP. Como resultado, os ensaios de padronização do teste ELISA apresentaram elevada sensibilidade na diluição do antígeno em 1/100000 e nas diluições de soro dos animais em 1/100, 1/200 e 1/400. Além disso, foi detectada elevada concentração de anticorpos anti- eCG nos momentos D21 e D28 nas concentrações 11,57 UI/mL, 17,34 UI/mL e 26 UI/mL. A análise realizada no momento D5 não apresentou diferença significativa quando comparado ao grupo controle nas concentrações 11,57 UI/mL, 17,34 UI/mL e 26 UI/mL, nas diluições do soro entre 1/100 e 1/6400. Por fim, os animais tratados com o padrão PMSG tanto no momento D5 quanto no momento D28, apresentaram aumento de peso de ovário de forma significativa quando comparado ao grupo controle. Palavras-chave: Gonadotrofina. eCG. ELISA.