Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de mPCR

Abstract

RESUMO: As infecções causadas por bactérias do gênero Aeromonas estão entre as doenças mais comuns em peixes cultivados em todo o mundo, com ocorrência de aeromoniose em todos os países que possuem cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova multiplex PCR (mPCR) para diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina (aerA). Para padronização da mPCR foram utilizadas cepas de referência de várias espécies do gênero Aeromonas e de outros gêneros. Também foram usadas cepas de campo de A. hydrophila oriundas de cultivos de peixes pacamãs (Lophiosilurus alexandri) e Aeromonas spp. de tilápias do Nilo. Os primers foram desenhados com base na região 16S rRNA e aerA. Para verificar a melhor temperatura de anelamento foram utilizados gradientes entre 59°C a 61°C com 40ng de DNA molde. Os produtos da amplificação da região 16S rRNA e do gene aerA apresentaram 786 e 550pb, respectivamente. A mPCR apresentou melhor temperatura de anelamento a 57,6°C com limite de detecção das concentrações de DNA em ambos genes (16S rRNA and aerA) de 10-10g/μL. A mPCR padronizada é rápida, sensível e específica no diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos métodos de diagnóstico convencionais, podendo ser utilizada em cultivos comerciais de tilápias do Nilo ou outros peixes. A identificação do gene aerolisina é uma importante ferramenta na determinação do potencial patogênico dos isolados de Aeromonas spp. estudados.

Aeromonas from farmed tambaqui from North Brazil: molecular identification and pathogenic potential

“…Molecular techniques such as polymerase chain reaction (PCR) have advantages over conventional microbiological identification methods, such as rapid diagnosis and specificity for the investigated agent (ABU-ELALA et al, 2015), as well as the use of this technique allows the study of virulence factors of the strains, allowing to determine the potential degree of pathogenicity of a strain of interest (kIM et al, 2018). Several virulence factors have been described as important in the pathogenesis of infections caused by Aeromonas spp., among the most studied are aerolysin (AerA), cytotoxic enterotoxin (Act), and cytotonic enterotoxin (Ast).…”

Identification of pathogens in fish polyculture systems in southern Minas Gerais, Brazil

“…The impact of these bacteria must be considered since several researchers affirm that the exposure to the aquatic ecosystem and its habitats can be precursors of diseases caused by Aeromonas and Edwardsiella (KIM et al, 2018;WIEDENMAYER;GILBERT, 2006). These are facultative pathogens that target hosts weakened or affected by other etiological agents, identified as secondary invaders, and establish themselves in the same way as other bacterial, viral, or parasitic infections, as well as those caused by nutritional or stress-related factors (BOTREL et al, 2010;MACHADO, TAKEMOTO, 1997).…”