Yeast Saccharomyces cerevisiae is a unique model for studying the molecular mechanisms of exotoxin-mediated antagonistic relationships between coexisting microorganisms. The synthesis of yeast toxins can be considered as an example of allelopathy and environmental competition. The elucidation of the role of allelopathy in the formation of microbial communities is of great interest for modern ecology. Yeast toxins are widely used in medicine, the food industry and biotechnology. The review examines the nature of exotoxins, the mechanisms of inheritance and interaction of the virus and yeast cells, as well as the prospects for their practical application.
д. м. музаев, а. м. румянцев, © е. В. самбук, м. В. Падкина Санкт-Петербургский государственный университетдрожжи Pichia pastoris исполь-зуются для синтеза множества рекомбинантных белков. широ-кое применение этого вида дрожжей в биотехнологии обусловлено отно-сительной простотой культивирова-ния, дешевизной используемых сред и возможностью осуществления посттрансляционных модификаций белков. основными способами по-вышения выхода рекомбинантного белка являются увеличение числа копий генов, кодирующих иссле-дуемый белок, а также коэкспрес-сия вспомогательных факторов, участвующих в фолдинге, созре-вании и секреции белка. необхо-димым условием для применения этих подходов является расширение коллекции ауксотрофных мутантов. В ходе данной работы была создана коллекция плазмид и штаммов, поз-воляющая осуществлять множес-твенную интеграцию чужеродных генов в геном P. pastoris.ключевые слова: C Pichia pastoris; рекомбинантные белки; экспрессия генов; генная инженерия. новые штаммы дрожжей Pichia Pastoris -продуценты гетерологичных белков ВВЕДЕНИЕ Дрожжи P. pastoris широко используются для наработки самых разно-образных белков, начиная от столбнячного токсина и эпидермального фак-тора роста мыши и заканчивая мембранными белками, включающими ABC транспортеры, аквапорины и тетраспанины (Darby et al., 2012;Cregg et al., 2000). Исходя из опыта применения P. pastoris в биотехнологии известно, что существует приблизительно 50-75%-я вероятность удачного синтеза любого чужеродного белка в P. pastoris. При этом использование дрожжей P. pastoris открывает широкие возможности для оптимизации условий куль-тивирования, что позволяет достигать необычайно высоких уровней продук-ции целевого белка .Активное использование дрожжей P. pastoris в современных биотехноло-гических производствах напрямую связано с особенностями их метаболизма. К преимуществам метилотрофных дрожжей можно отнести простоту культи-вирования, относительную дешевизну среды и возможность применения раз-личных методик генетических манипуляций. Ещё одной особенностью этого вида дрожжей является способность осуществлять посттрансляционные мо-дификации, характерные для белков высших эукариот.В биотехнологии при работе с дрожжами самой сложной задачей яв-ляется достижение оптимального баланса между уровнем синтеза целе-вого белка и жизнеспособностью штаммов-продуцентов. Применение P. pastoris открывает широчайшие возможности для оптимизации условий культивирования. Одним из способов увеличения уровня синтеза целевого белка является получение штаммов P. pastoris, несущих множественные копии чужеродного гена. Другим подходом, чаще всего используемым при работе с секреторными белками, является коэкспрессия генов, кодирую-щих различные вспомогательные факторы. Для успешного применения этих подходов необходимо создание коллекции плазмид, позволяющих осуществлять множественную интеграцию чужеродных генов в геном P. pastoris, а также получение множественно-маркированных штам-мов-продуцентов.Одной из стратегий усиления экспрессии специфичного гена в P. pastoris является увеличен...
Background. A selective system based on the M1 virus of the yeast Saccharomyces cerevisiae was proposed. Methods. To create a recipient strain, a DNA fragment encoding the killer toxin of the M1 virus under the control of the regulated promoter of the GAL1 gene was inserted into the genome of S. cerevisiae strains Y-1236 and Y-2177. Results. Integration of such expression cassette leads to the conditional lethality - resulting strains die on a medium with galactose when killer toxin synthesis occurs. A linear DNA fragment containing the gene of interest flanked by sequences homologous to the promoter of the GAL1 gene and the termination region of the CYC1 gene is used to transform the obtained strains. During transformation due to homologous recombination, the sequence encoding the killer toxin is cleaved and the transformants grow on a medium with galactose. Conclusion. The proposed selective system combines the main advantages of other systems: the use of simple media, without the need to add expensive antibiotics, and a simplified technique for constructing expression cassettes and selecting transformants.
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
hi@scite.ai
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.