The Schistosoma mansoni Sm14 antigen belongs to the fatty acid-binding protein family and is considered a vaccine candidate against at least two parasite worms, Fasciola hepatica and S. mansoni. Here the genomic sequence and the polymorphism of Sm14 have been characterized for the first time. We found that the conserved methionine at position 20 is polymorphic, being exchangeable with threonine (M20T). To evaluate the function of the amino acid residue at this position, we have also constructed the mutant Sm14-A20 besides the two native isoforms (Sm14-M20 and Sm14-T20). The three purified recombinant His 6 -tagged Sm14 proteins (rSm14-M20, rSm14-T20, and rSm14-A20) present a predominant -barrel structure as shown by CD spectroscopy. Thermal and urea unfolding studies evidenced a higher structural stability of rSm14-M20 over the other forms (rSm14-M20>rSm14-T20>rSm14-A20). All of the Sm14 proteins were able to bind 11-(dansylamino)undecanoic acid (DAUDA) without substantial difference in the binding affinity. However, rSm14-M20 exhibited a higher affinity for natural fatty acids than the rSm14-T20 and rSm14-A20 proteins as judged by competitive experiments against DAUDA (rSm14-M20>rSm14-T20> rSm14-A20). The rSm14-M20 or rSm14-T20 isoforms but not the rSm14-A20 mutant was able to induce significant protection against S. mansoni cercariae challenge in immunized mice. The level of protection efficacy correlates with the extent of structure stability of the recombinant Sm14 isoforms and mutant.
Recebido em 17/7/06; aceito em 1/12/06; publicado na web em 24/7/07 CHARACTERIZATION OF THE INCLUSION COMPLEX ROPIVACAINE: β-CYCLODEXTRIN. Ropivacaine (RVC) is a widely used local anesthetic. The complexation of RVC with β-cyclodextrin (β-CD) is of great interest for the development of more efficient local anesthetic formulations. The present work focuses on the characterization of the RVC:β-CD complex by nuclear magnetic resonance (NMR). The stoichiometry of the complex is 1:2 RVC:β-CD. DOSY-NMR shows that the association constant is 55.5 M -1. Longitudinal relaxation time results show that RVC changes its mobility in the presence of β-CD. This study is focused on the physicochemical characterization of inclusion complexes that are potentials options for pain treatment.Keywords: ropivacaine; cyclodextrin; NMR. INTRODUÇÃOOs anestésicos locais (AL) são compostos químicos cuja atividade farmacológica primária envolve o bloqueio reversível da condução nervosa. O primeiro composto a ser utilizado como anestésico local foi a cocaína, um alcalóide isolado das folhas de Erithroxylon coca, que teve sua ação demonstrada por Köller (1884) ao utilizá-la como anestésico oftálmico. Após ter sido empregada na clínica durante longo tempo, a cocaína foi substituída por outras substâncias, devido aos seus efeitos tóxicos, como dependência química e psíquica 1 . A ropivacaína (RVC) é um AL pertencente à classe das aminoamidas 1-3 . A ropivacaína, juntamente com a lidocaína (LDC) e a bupivacaína (BVC), tem sido um dos compostos de escolha na terapia da dor aguda e crônica 4 . A RVC é um AL semelhante à BVC, possuindo início de ação moderada, longa duração, bloqueio da condução e separação significante entre o bloqueio sensorial e motor 5 . Porém a RVC induz menor toxicidade aos sistemas nervoso central e cardiovascular e promove maior grau de dissociação entre o bloqueio motor e sensorial, sendo útil na administração epidural, infiltração e alívio da dor pós-operatória 6-11 . Como as características desejáveis para uma molécula anestésica incluem, além de longa duração de ação e da seletividade para o bloqueio sensorial em relação ao bloqueio motor, a diminuição da toxicidade local e/ou sistêmica 13 , uma alternativa que, atualmente, tem se mostrado capaz de promover estes efeitos desejá-veis é a liberação modificada desses fármacos, através de formação de complexos de inclusão com ciclodextrinas 12,13 . As ciclodextrinas (Figura 1) são produtos cíclicos da hidrólise enzimática do amido por alguns microorganismos 14 . As três ciclodextrinas naturais são alfa (α-CD), beta (β-CD) e gama (γ-CD), compostas de seis, sete e oito unidades de D-(+)-glicopiranose, respectivamente, unidas por ligações α-1,4. Estes compostos possuem em sua estrutura grupos hidroxila primários e secundários orientados para o exterior. Assim, possuem exterior hidrofílico e uma cavidade interna hidrofóbica. Tal cavidade permite às ciclodextrinas complexarem moléculas que apresentem dimensões compatíveis e alterarem suas propriedades físico-químicas, como solubi...
Meus sinceros agradecimentos à Dra. Thelma de Aguiar Pertinhez que sempre acreditou na minha capacidade e me possibilitou, não só os primeiros passos, mas toda a minha caminhada acadêmica. Obrigada por partilhar os seus conhecimentos, por ser sempre disponível, paciente e por me orientar por todos esses anos, mesmo à distância. E principalmente, obrigada por toda a amizade e ensinamentos que foram além da ciência.Ao Dr. Celso E. Benedetti que, sem medir muito as conseqüências, aceitou ser meu coorientador. Agradeço-te pela sua disponibilidade, pelas excelentes discussões científicas e por todo o entusiasmo e apoio.Ao Prof. Dr. Alberto Spisni pela oportunidade em trabalhar nos seus grupos de pesquisa, tanto no brasileiro quanto no italiano, por toda a confiança depositada em mim e por ter-me aberto tantas portas. Grazie mille! À Dra. Luigia Pazzagli e ao Prof. Dr. Gianni Cappugi que nos envolveram nesse projeto e por terem cedido as células de leveduras para a expressão da proteína de estudo, sem o qual esse trabalho não teria iniciado. Ao Prof. Dr. Daniel O. Cicero que me recebeu em seu laboratório e de forma especial a Dra. Mariana Gallo, que me acompanhou em todos os passos de coleta e análise de dados de RDC e cálculo de estrutura, sempre me apoiando com muita confiança e otimismo. Mari, grazie mille per tutto l'aiuto, pazienzia e generosità! Às agências de fomento à pesquisa FAPESP e CAPES pelo apoio financeiro. Ao
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