Background:A new dye‐ligand chromatographic procedure has been developed to produce a highly purified factors VIII/von Willebrand complex (FVIII/vWF) concentrate from plasma cryoprecipitate.Factor VIII (FVIII) and von Willebrand factor (vWF) circulate in the plasma as a non‐covalent protein complex FVIII/vWF. The levels of factor VIII in vivo are coordinately regulated with levels of vWF.Willebrand's disease together with hemophilia A are the most common heredity diseases of the hemostasis system. The concentrate of FVIII/vWF complex is used for the treatment of these diseases.The main method of obtaining of plasma concentrates of FVIII/vWF complex remains the method of ion‐exchange chromatography. With the use of ion exchange chromatography it is not possible to maintain the initial ratio because the elution of these two factors from the ion exchanger occurs at different ionic strength values. That is, the ion‐exchange chromatography method does not allow for the absolute yield of vWF together with FVIII.Aims:investigate the ratio of FVIII/vWF complex at various stages of the technology opurification of antihemophilic concentrate.Methods:Cryoprecipitation, ion‐exchange chromatography on DEAE‐Sepharose FAST FLOW; dye‐ligand affinity chromatography.Results:We development of a new method to obtain purified preparation of the complex FVIII/vWF, that inclused cryoprecipitation, ion‐exchange chromatography on DEAE‐Sepharose FAST FLOW and dye‐ligand affinity chromatography.The degree purification of FVIII was 95.3 times on the stage of ion‐exchange chromatography. The ratio FVIII/vWF has changed approximately twice (from 0.78 to 1.75) (Table 1). We used a buffer NaCl with an ionic strength of 0.3 M for co‐elution of FVIII and vWF. However, part of the vWF was eluted with the first fractions (0.15 M NaCl).The research demonstrated that the process of purification of the FVIII and vWF with dye‐ligand is due to the phenomenon of the negative affinity adsorption. This property we used in the technology of obtaining of FVIII/vWF complex. This property provides the output level of the relationship this provides the output level of the relationship (Table 1).Summary/Conclusion: It was established that at the stage of dye‐ligand chromatography, the loss from the initial activity of FVIII is practically absent and the original ratio of FVIII/vWF is saved.image
Проблема переробки плазми донорської крові з метою створення ефективних лікарських препаратів є актуальною. На сьогоднішній день створено велику кіль-кість методів фракціонування плазми крові, виділення і очищення її компонентів, зокрема, факторів зсідання крові та фібринолізу. Особливо привабливими з точки зору ефективності є методи біоспецифічної хроматографії. Хроматографічне очи-щення фактора VIII вважається одним із технологічно найважчих процесів через потенційний ризик його активації та нестабільність за наявності протеаз плазми крові. Для отримання очищених препаратів фактора VIII широко використовують аніонообмінну, гель-проникну й афінну хроматографії. Cинтетичні тріазинові барв-ники мають низку переваг як ліганди, тому ми дослідили можливість використання барвник-лігандної афінної хроматографії на макропористих кремнеземних носіях для виділення й очищення фактора VIII зсідання крові. У статті описано сорбцію цього фактора з різними хроматографічними сорбентами та запропоновано спосіб його очищення із кріопреципітату методом зв'язування нецільових білків на Діа-сорбі амінопропіловому з іммобілізованими тріазиновими барвниками. У результа-ті проведеної роботи було відібрано групу сорбентів, яка найкраще надається для процесу очищення фактора VIII зсідання крові: Діасорб-Активний пурпуровий 4ЖТ, Діасорб-Procion gelb M4R, Діасорб-Procion blue HB, Діасорб-Procion blue MXR та Діасорб-Активний яскраво-голубий К. Очищення фактора VIII відбувалося завдяки явищу негативної афінної хроматографії. Питома активність цього фактора зрос-тала приблизно на порядок.Ключові слова: фактор VIII зсідання крові, афінна хроматографія, тріазино-ві активні барвники. ВСТУПЗастосування класичних хроматографічних методів, наприклад, іонообмінної хроматографії чи гель-фільтрації, для виділення й очищення певних груп білків, що відрізняються за своїми фізико-хімічними властивостями незначно, пов'язане з певними труднощами та потребує тривалих затрат часу [11]. Відповідно, це при-зводить до значної втрати їхньої біологічної активності через процеси денатурації, ензиматичного гідролізу та ін.
З метою корекції дефіциту фактора або для запобігання кровотеч у пацієнтів з гемофілією А проводять замісну терапію, яка полягає у введенні плазмових або рекомбінантних препаратів фактора VIII. Для лікування гемофілії в Україні вико-ристовують низку препаратів фактора, як плазмового так і рекомбінантного похо-дження. Залежно від ступеня очищення, відрізняють плазмові препарати проміж-ного ступеня очищення, отримані за допомогою традиційних методів осадження/ адсорбції, та високоочищені препарати, виділені методами іонообмінної або афін-ної хроматографії. З кінця 1980-х років у клінічній практиці почали використовувати рекомбінантні препарати фактора. Вони одержані методами генної інженерії з лінії клітин яєчника китайського хом'яка або нирки новонародженого хом'яка. Рекомбі-нантні фактори поділяють на покоління залежно від вмісту домішкового білка лю-дини чи тварини в кінцевому продукті. У статті проведено аналіз основних плазмо-вих і рекомбінантних препаратів фактора VIII, зареєстрованих в Україні. Описані їх основні властивості, способи отримання та методи вірусної інактивації. Узагаль-нено переваги та недоліки плазмових і рекомбінантних препаратів фактора згор-тання крові.Ключові слова: згортання крові, плазмові та рекомбінантні препарати фак-тора VIII, хроматографія, вірусна безпека. ВСТУПЛікування хворих на гемофілію полягає у введенні компенсаторної кількості дефіцитного фактора згортання крові, зокрема, при гемофілії А -фактора VIII (FVIII). Проте слід зауважити, що є певна відмінність між лікуванням хворих із ге-морагічними ускладненнями та проведенням профілактичного введення FVIII. Тому на даний момент існує два види терапії: так звана "терапія на вимогу" та про-філактична [9].Наприклад, "терапія на вимогу" проводиться під час геморагічних ускладнень і потребує негайного реагування шляхом введення препарату FVIII. Профілактичне лікування полягає у періодичному введенні фактора та може бути розділене на пер-винне і вторинне. Первинна профілактика досягається довготривалим введенням Biol. Stud. 2014: 8(1); 197-204 •
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
customersupport@researchsolutions.com
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.