RESUMOA artrite-encefalite caprina (CAE) é diagnosticada rotineiramente pela técnica de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), que é considerada pouco sensível. Objetivou-se com este estudo padronizar testes de Elisa-i e Western Blot (WB) para diagnóstico precoce de anticorpos em caprinos contra CAEV e comparar os resultados obtidos nesses testes com a prova de IDGA. Para a padronização dos testes Elisa-i e WB, utilizaram-se diferentes concentrações e diluições de antígeno, soros e conjugado. No Elisa-i, adotaram-se microplacas rígidas com 96 poços, sendo a combinação de concentração de 0,5µg/poço de antígeno e diluições de 1:100 de soro e 1:1500 de conjugado a que apresentou melhor resultado. No WB foram utilizadas membranas de nitrocelulose, definindo-se as diluições de 1:50 de soro e 1:15000 de conjugado. Para avaliar o desempenho das técnicas, 222 amostras de soro caprino foram testadas e os dados obtidos foram comparados com o IDGA. A sensibilidade e a especificidade do Elisa-i/IDGA, WB/IDGA e WB/Elisa-i foram de 70% e 91%, 100% e 72,6%, 84,6% e 76,5%, concomitantemente. O índice Kappa desses testes foi de 0,35, 0,2 e 0,36, respectivamente. As técnicas de Elisa-i e WB apresentaram-se mais sensíveis que a IDGA, podendo ser utilizadas como ferramentas para o diagnóstico precoce da CAE.Palavras-chave: especificidade, infecção, LVPR, sensibilidade, sorologia ABSTRACT Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is routinely diagnosed with the Agarose Gel Immunodiffusion (AGID) technique, which is considered to have low sensitivity. The objective of this study was to standardize testing i-Elisa and Western Blot for early detection of antibodies against CAEV in goats and
The present study focuses on Cryptosporidium infections of foals in Brazil. A total of 92 animals of different breeds from 11 farms in the vicinity of Araçatuba in the state of São Paulo, were examined. According to PCR targeting the 18S rRNA gene, Cryptosporidium sp. DNA was detected in 21.7% (20/92) of foals. Good quality 18S rRNA, actin, HSP70 and gp60 genes nPCR amplicons were obtained from five fecal samples. PCR amplification and sequencing of a fragment of the GP60 sporozoite surface glycoprotein gene revealed C. parvum genotypes IIaA18G3R1, IIaA15G2R1. Interestingly, we also detected in two foals a GP60 genotype related to the human parasite C. hominis.
ResumoEstudos referentes á criptosporidiose são essenciais, devido sua relevância em saúde pública e por sua patogenicidade em animais de produção e de companhia. Nos últimos 20 anos, houve uma rápida expansão das pesquisas envolvendo o gênero Cryptosporidium, em grande parte relacionada a estudos moleculares, propiciando a descrição de várias espécies, genótipos e subtipos do parasito. A caracterização molecular de isolados de diferentes origens (animal, humana e ambiental) tem sido amplamente usada com o intuito de investigar o potencial zoonótico deste protozoário. As formas de transmissão documentadas são de animais para o ser humano, de pessoa para pessoa, por meio de ingestão ou do uso de água destinada a lazer contaminada direta ou indiretamente com oocistos esporulados. A elevada taxa de animais naturalmente infectados e a susceptibilidade ao protozoário justificam a importância de se atentar para a ocorrência desta enfermidade. Assim, são demonstrados aspectos epidemiológicos desta zoonose em animais domésticos. Palavras-chave: Cryptosporidium spp., ruminantes, equinos, caninos, felinos AbstractStudies related cryptosporidiosis will be essential, due to its relevance in public health and pathogenicity in pets and production animals. Over the past 20 years, there has been a rapid expansion of research involving the Cryptosporidium genus, largely related to molecular studies, providing a description of
Pesq. Vet. Bras. 34(8):728-732, agosto 2014 728 RESUMO.-O presente estudo teve como objetivo determinar a ocorrência da infecção por Cryptosporidium spp. em cabritos de Quixadá, Ceará, Brasil. Participaram do estudo 400 cabritos, com idade entre três e 360 dias, de ambos os sexos, com e sem padrão racial definido, procedentes de 25 estabelecimentos rurais distribuídos em três circuitos. As fezes foram cadastradas de acordo com o aspecto e cor, distribuídas em tubos tipo "eppendorf ®" e congeladas in natura a -20°C, até o momento das extrações de DNA genô-mico do parasito com auxílio de kit comercial. Para amplificação de fragmentos da subunidade 18S do RNA ribossô-mico (rRNA) foi utilizada a "Nested"-PCR. A ocorrência de Cryptosporidium spp em cabritos de Quixadá foi de 7,50% (30/400). A frequência no período seco e no chuvoso foi de 9,55% (19/199) e 5,47% (11/201), respectivamente (χ 2 =2,39 e P>0,05). Amostras positivas foram identificadas em 64,00% (16/25) das propriedades estudadas e dessas amostras 50,00% (15/30) e 70,00% (21/30) tinham as fezes com aspecto e cor normais, respectivamente, sugerindo que cabritos assintomáticos estão eliminando oocistos. Não foi observada positividade para Cryptosporidium spp.
ABSTRACT:Caprine arthritis encephalitis causes considerable losses in goat production. The main form of the caprine arthritis encephalitis virus transmission is through the ingestion of colostrum or milk from infected females. However, some transmissions cannot be explained in this manner. Therefore, this study aimed to evaluate transplacental transmission of caprine arthritis encephalitis virus. Blood samples were collected from 283 newborn kids of Anglo-Nubian and Saanen breeds born from seropositive and seronegative goats. Samples were collected immediately after birth and analyzed with agarose gel immunodiffusion and western blot. All samples were negative in the agarose gel immunodiffusion. However, the western blot test demonstrated that four kids were born positive for caprine arthritis encephalitis virus. This result indicates that although in a low frequency (1.4%), there is a possibility of transplacental transmission of small ruminant lentivirus.KEYWORDS: small ruminant lentivirus; agarose gel immunodiffusion; western blot. RESUMO:A artrite encefalite caprina causa perdas considerá-veis para a produção caprina. A principal forma de transmissão do vírus da artrite encefalite caprina é a ingestão de colostro ou leite de fêmeas infectadas. No entanto, algumas transmissões não podem ser explicadas por esta via. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina por via transplacentária (vertical). Foram realizadas coletas de sangue em 283 crias recém-nascidas das raças Anglo-Nubiana e Saanen, provenientes de progenitores soropositivos e soronegativos. As amostras foram coletadas logo após o nascimento e analisadas pelas técnicas de imunodifusão em gel de agarose e western blot. No teste de imunodifusão em gel de agarose, nenhum cabrito foi detectado reagente. Porém, no teste de western blot, quatro cabritos nasceram soropositivos. Esse resultado indica que, apesar de baixa frequência (1,4%), existe a possibilidade de transmissão via transplacentária do lentivírus de pequenos ruminantes.PALAVRAS-CHAVE: lentivírus de pequenos ruminantes; imunodifusão em gel de agarose; western blot.
The present study aimed to analyze the occurrence of infection by Cryptosporidium spp. in mares and their respective foals. This study was carried out in 11 farms located in the municipalities of Araçatuba, Birigui, Guararapes and Santo Antônio do Aracangua, in the northwest region of the State of Sao Paulo, from November 2010 to March 2011. A total of 98 mares and 98 foals of several breeds were analyzed; among foals, 59 were males and 39 females, aged from three to 330 days. Feces were collected directly from the rectal ampulla, purified and processed according to modified Kinyoun stain. Occurrence of Cryptosporidium spp. was 21.4% (21/98) for foals and 18.4% (18/98) for mares. Occurrence of Cryptosporidium spp. had significant association with breeds and age of animals. Results obtained led to the conclusion that foals older than two months and Mangalarga animals are less susceptible to the occurrence of Cryptosporidium spp.Keywords: Cryptosporidium, frequency, mares, foals. ResumoO presente estudo teve como objetivo analisar a ocorrência da infecção por Cryptosporidium spp. em éguas e seus respectivos potros. Este estudo foi realizado em 11 fazendas localizadas nos municípios de Araçatuba, Birigui, Guararapes e Santo Antônio do Aracangua, na região Noroeste do Estado de São Paulo, de novembro de 2010 a março de 2011. Um total de 98 éguas e 98 potros de diversas raças foram analisados, sendo que, entre os filhotes, 59 eram machos e 39 fêmeas, cujas idades variavam de três até 330 dias. Fezes foram colhidas diretamente da ampola retal, purificadas e processadas pela técnica de Kinyoun modificada. A ocorrência de Cryptosporidium spp. observada foi de 21,4% (21/98) para potros e 18,4% (18/98) para éguas. A ocorrência de Cryptosporidium spp. teve uma associação significativa com a raça e a idade dos animais. A partir dos resultados obtidos, conclui-se neste estudo que potros com idade superior a dois meses e animais da raça Mangalarga foram menos susceptíveis à ocorrência de Cryptosporidium spp.Palavra-chave: Cryptosporidium, frequência, éguas, potros.
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