RESUMOA artrite-encefalite caprina (CAE) é diagnosticada rotineiramente pela técnica de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), que é considerada pouco sensível. Objetivou-se com este estudo padronizar testes de Elisa-i e Western Blot (WB) para diagnóstico precoce de anticorpos em caprinos contra CAEV e comparar os resultados obtidos nesses testes com a prova de IDGA. Para a padronização dos testes Elisa-i e WB, utilizaram-se diferentes concentrações e diluições de antígeno, soros e conjugado. No Elisa-i, adotaram-se microplacas rígidas com 96 poços, sendo a combinação de concentração de 0,5µg/poço de antígeno e diluições de 1:100 de soro e 1:1500 de conjugado a que apresentou melhor resultado. No WB foram utilizadas membranas de nitrocelulose, definindo-se as diluições de 1:50 de soro e 1:15000 de conjugado. Para avaliar o desempenho das técnicas, 222 amostras de soro caprino foram testadas e os dados obtidos foram comparados com o IDGA. A sensibilidade e a especificidade do Elisa-i/IDGA, WB/IDGA e WB/Elisa-i foram de 70% e 91%, 100% e 72,6%, 84,6% e 76,5%, concomitantemente. O índice Kappa desses testes foi de 0,35, 0,2 e 0,36, respectivamente. As técnicas de Elisa-i e WB apresentaram-se mais sensíveis que a IDGA, podendo ser utilizadas como ferramentas para o diagnóstico precoce da CAE.Palavras-chave: especificidade, infecção, LVPR, sensibilidade, sorologia ABSTRACT Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is routinely diagnosed with the Agarose Gel Immunodiffusion (AGID) technique, which is considered to have low sensitivity. The objective of this study was to standardize testing i-Elisa and Western Blot for early detection of antibodies against CAEV in goats and
The present study focuses on Cryptosporidium infections of foals in Brazil. A total of 92 animals of different breeds from 11 farms in the vicinity of Araçatuba in the state of São Paulo, were examined. According to PCR targeting the 18S rRNA gene, Cryptosporidium sp. DNA was detected in 21.7% (20/92) of foals. Good quality 18S rRNA, actin, HSP70 and gp60 genes nPCR amplicons were obtained from five fecal samples. PCR amplification and sequencing of a fragment of the GP60 sporozoite surface glycoprotein gene revealed C. parvum genotypes IIaA18G3R1, IIaA15G2R1. Interestingly, we also detected in two foals a GP60 genotype related to the human parasite C. hominis.
ResumoEstudos referentes á criptosporidiose são essenciais, devido sua relevância em saúde pública e por sua patogenicidade em animais de produção e de companhia. Nos últimos 20 anos, houve uma rápida expansão das pesquisas envolvendo o gênero Cryptosporidium, em grande parte relacionada a estudos moleculares, propiciando a descrição de várias espécies, genótipos e subtipos do parasito. A caracterização molecular de isolados de diferentes origens (animal, humana e ambiental) tem sido amplamente usada com o intuito de investigar o potencial zoonótico deste protozoário. As formas de transmissão documentadas são de animais para o ser humano, de pessoa para pessoa, por meio de ingestão ou do uso de água destinada a lazer contaminada direta ou indiretamente com oocistos esporulados. A elevada taxa de animais naturalmente infectados e a susceptibilidade ao protozoário justificam a importância de se atentar para a ocorrência desta enfermidade. Assim, são demonstrados aspectos epidemiológicos desta zoonose em animais domésticos. Palavras-chave: Cryptosporidium spp., ruminantes, equinos, caninos, felinos AbstractStudies related cryptosporidiosis will be essential, due to its relevance in public health and pathogenicity in pets and production animals. Over the past 20 years, there has been a rapid expansion of research involving the Cryptosporidium genus, largely related to molecular studies, providing a description of
Pesq. Vet. Bras. 34(8):728-732, agosto 2014 728 RESUMO.-O presente estudo teve como objetivo determinar a ocorrência da infecção por Cryptosporidium spp. em cabritos de Quixadá, Ceará, Brasil. Participaram do estudo 400 cabritos, com idade entre três e 360 dias, de ambos os sexos, com e sem padrão racial definido, procedentes de 25 estabelecimentos rurais distribuídos em três circuitos. As fezes foram cadastradas de acordo com o aspecto e cor, distribuídas em tubos tipo "eppendorf ®" e congeladas in natura a -20°C, até o momento das extrações de DNA genô-mico do parasito com auxílio de kit comercial. Para amplificação de fragmentos da subunidade 18S do RNA ribossô-mico (rRNA) foi utilizada a "Nested"-PCR. A ocorrência de Cryptosporidium spp em cabritos de Quixadá foi de 7,50% (30/400). A frequência no período seco e no chuvoso foi de 9,55% (19/199) e 5,47% (11/201), respectivamente (χ 2 =2,39 e P>0,05). Amostras positivas foram identificadas em 64,00% (16/25) das propriedades estudadas e dessas amostras 50,00% (15/30) e 70,00% (21/30) tinham as fezes com aspecto e cor normais, respectivamente, sugerindo que cabritos assintomáticos estão eliminando oocistos. Não foi observada positividade para Cryptosporidium spp.
ABSTRACT:Caprine arthritis encephalitis causes considerable losses in goat production. The main form of the caprine arthritis encephalitis virus transmission is through the ingestion of colostrum or milk from infected females. However, some transmissions cannot be explained in this manner. Therefore, this study aimed to evaluate transplacental transmission of caprine arthritis encephalitis virus. Blood samples were collected from 283 newborn kids of Anglo-Nubian and Saanen breeds born from seropositive and seronegative goats. Samples were collected immediately after birth and analyzed with agarose gel immunodiffusion and western blot. All samples were negative in the agarose gel immunodiffusion. However, the western blot test demonstrated that four kids were born positive for caprine arthritis encephalitis virus. This result indicates that although in a low frequency (1.4%), there is a possibility of transplacental transmission of small ruminant lentivirus.KEYWORDS: small ruminant lentivirus; agarose gel immunodiffusion; western blot. RESUMO:A artrite encefalite caprina causa perdas considerá-veis para a produção caprina. A principal forma de transmissão do vírus da artrite encefalite caprina é a ingestão de colostro ou leite de fêmeas infectadas. No entanto, algumas transmissões não podem ser explicadas por esta via. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina por via transplacentária (vertical). Foram realizadas coletas de sangue em 283 crias recém-nascidas das raças Anglo-Nubiana e Saanen, provenientes de progenitores soropositivos e soronegativos. As amostras foram coletadas logo após o nascimento e analisadas pelas técnicas de imunodifusão em gel de agarose e western blot. No teste de imunodifusão em gel de agarose, nenhum cabrito foi detectado reagente. Porém, no teste de western blot, quatro cabritos nasceram soropositivos. Esse resultado indica que, apesar de baixa frequência (1,4%), existe a possibilidade de transmissão via transplacentária do lentivírus de pequenos ruminantes.PALAVRAS-CHAVE: lentivírus de pequenos ruminantes; imunodifusão em gel de agarose; western blot.
RESUMOO objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de ovinos soropositivos para o vírus da lín-gua azul (VLA) no Estado do Ceará, Brasil, e analisar as proteínas imunogênicas das cepas virais circulantes nesses rebanhos. O teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA) foi utilizado para pesquisar 271 amostras de soro oriundas de 16 rebanhos. Os resultados demonstraram que 27,3% (74/271) das amostras analisadas apresentaram anticorpos contra o agente e 68,8% (11/16) das propriedades tiveram animais positivos. O immunoblotting (IB) foi utilizado para analisar as proteínas imunogênicas do VLA a partir dos soros de animais positivos no IDGA. Os soros demonstraram forte reação contra a proteína viral VP2. Para o VLA, das sete proteínas estruturais, a VP2 é a principal a estimular a resposta imune protetora. Concluiu-se que a soropositividade para a língua azul (LA) nos rebanhos ovinos estudados no Ceará é alta, apesar dos animais não apresentarem sinais clínicos, indicativo de que o vírus ocorra de forma endêmica. Além disso, a resistência à doença apresentada pelos animais pode estar relacionada com a forte reação imunológica desses à proteína VP2. Sendo assim, outros estudos são necessários para melhor esclarecer a situação epidemiológica da LA no país, através da identificação dos vetores e sorotipos virais circulantes nas diferentes regiões. Of the seven BTV structural proteins, VP2 is the major protein to elicit protective immune responses. It was concluded that bluetongue (BT) seropositivity in sheep flocks studied in Ceará is high, despite that the animal's do not show clinical signs, indicating that it occurs in an endemic form. The animals' resistance to the disease may be related to the strong immune response to the protein VP2. Therefore, further studies are needed to better clarify the epidemiological situation of BT in Brazilian sheep flocks, through the identification of viral vectors and serotypes circulating in different regions. PALAVRAS-CHAVE:
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