Padronização do Elisa indireto e Western Blot para diagnóstico da artrite-encefalite caprina

Abstract

 RESUMOA artrite-encefalite caprina (CAE) é diagnosticada rotineiramente pela técnica de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), que é considerada pouco sensível. Objetivou-se com este estudo padronizar testes de Elisa-i e Western Blot (WB) para diagnóstico precoce de anticorpos em caprinos contra CAEV e comparar os resultados obtidos nesses testes com a prova de IDGA. Para a padronização dos testes Elisa-i e WB, utilizaram-se diferentes concentrações e diluições de antígeno, soros e conjugado. No Elisa-i, adotaram-se microplacas rígidas com 96 poços, sendo a combinação de concentração de 0,5µg/poço de antígeno e diluições de 1:100 de soro e 1:1500 de conjugado a que apresentou melhor resultado. No WB foram utilizadas membranas de nitrocelulose, definindo-se as diluições de 1:50 de soro e 1:15000 de conjugado. Para avaliar o desempenho das técnicas, 222 amostras de soro caprino foram testadas e os dados obtidos foram comparados com o IDGA. A sensibilidade e a especificidade do Elisa-i/IDGA, WB/IDGA e WB/Elisa-i foram de 70% e 91%, 100% e 72,6%, 84,6% e 76,5%, concomitantemente. O índice Kappa desses testes foi de 0,35, 0,2 e 0,36, respectivamente. As técnicas de Elisa-i e WB apresentaram-se mais sensíveis que a IDGA, podendo ser utilizadas como ferramentas para o diagnóstico precoce da CAE.Palavras-chave: especificidade, infecção, LVPR, sensibilidade, sorologia ABSTRACT Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is routinely diagnosed with the Agarose Gel Immunodiffusion (AGID) technique, which is considered to have low sensitivity. The objective of this study was to standardize testing i-Elisa and Western Blot for early detection of antibodies against CAEV in goats and

Use of serological diagnostic techniques in the control and eradication of caprine arthritis encephalitis: an update

“…Another disadvantage of AGID is that it is unsuitable for use in different types of samples, e.g., milk ). Rodrigues et al (2014) evaluated three serological tests for CAEV: AGID, ELISA-i, and WB that could be used in a Brazilian national control program. In the screening of a herd, adult goats showed anti-CAEV antibodies in AGID (6.8%), ELISA-i (14.9%), and WB (39.2%).…”

“…It is an excellent assay for use in screening herds as it has a high diagnostic sensitivity. Due to its lower diagnostic specificity, it is indicated for use in conjunction with a high-specificity assay such as the AGID test (PINHEIRO et al, 2010;GOUVEIA, 2012;RODRIGUES et al, 2014).…”

“…This technique allows detection by molecular weight of antibodies to various viral proteins including matrix protein (14-16 kDa), inner capsid protein (28 kDa), transmembrane glycoprotein (40 kDa), a 45-kDa protein, possibly precursor protein gag gene (50 kDa), a 67-kDa glycoprotein, and surface glycoprotein gp70 (70 kDa). The viral capsid protein (28 kDa) is most evident in the test by its abundance in the virus, whereas the gp135 protein is evident only in extremely positive sera (OLIVEIRA et al, 2008;PINHEIRO et al, 2011;RODRIGUES et al, 2014).…”

“…Western blot is capable of early detection of positive animals and has greater sensitivity and specificity when compared to other serological techniques such as AGID and ELISA (Table 1) (RODRIGUES et al, 2014). In experimentally infected goats, antibodies to the SRLV protein p28 were visualized by this technique four days pi.…”

“…In the few cases in which divergence may occur, the sera should be submitted to WB. Thus, high-sensitivity of ELISA will be combined with highspecificity of AGID and power of WB for an accurate diagnosis of SRLV (GOUVEIA, 2012;RODRIGUES et al, 2014).…”