Разработана методика количественного определения фенола в биологических лекарственных препаратах методом газожидкостной хроматографии. Оптимальные условия хроматографирования были подобраны для колонки DB-WAX (размер 30 м 0,25 мм 0,25 мкм) фирмы Agilent Technologies; температура инжектора 250 °C; деление потока 40:1; объем пробы 0,5 мкл; газ-носитель гелий; режим — постоянное давление; скорость потока 1,4 мл/мин; температурный профиль печи: начальная температура 160 °C, выдержка 3 мин, градиент 40 °C/мин до температуры 200 °C выдержка 0,6 мин, градиент 40 °C до температуры 220 °C; время анализа 7,133 мин; температура детектора 250 °C. Методика валидирована, аналитическая область методики установлена в диапазоне концентраций от 1 до 5 мг/мл фенола; подтверждены правильность и специфичность методики, оценена прецизионность. Полученные результаты позволяют рассматривать данную методику в качестве альтернативной для количественного определения фенола в биологических лекарственных препаратах.
Подобраны условия ферментативного гидролиза с применением эндопротеиназы Glu-C, рабочая область рН которой соответствовала рН-диапазону стабильности белка. Экспериментально подтверждено отсутствие аутогидролиза фермента. Анализ полученных пептидных карт, основанный на оценке стабильности времен удерживания и интенсивности 7 основных пиков, позволил выбрать их в качестве реперных. Масс-спектрометрический анализ состава фракций, соответствующих данным пикам, позволил идентифицировать 81 аминокислотный остаток, что соответствует 50 % аминокислотного покрытия первичной последовательности исходной молекулы. Разработана методика пептидного картирования с последующим разделением продуктов ферментативного гидролиза методом ВЭЖХ. Полученные результаты свидетельствуют о специфичности и стабильности полученных пептидных карт. Методика может быть использована при подтверждении подлинности структуры рекомбинантного интерферона бета-1b, не содержащего вспомогательных веществ белковой природы.
Препараты на основе рекомбинантных интерферонов бета высоко востребованы в клинической практике в качестве первой линии терапии при рассеянном склерозе. В Российской Федерации зарегистрированы препараты на основе рекомбинантных интерферонов β-1a и β-1b. Данные белки отличаются технологией производства и, как следствие, структурой. Рекомбинантный интерферон β-1а — гликозилированный белок, близкий по структуре к эндогенному интерферону человека. Рекомбинантный интерферон β-1b — негликозилированный белок, на 2 аминокислотных остатка отличающийся от интерферона β-1а. Существующие структурные особенности влияют на клиническую эффективность, побочное действие и интенсивность индукции нейтрализующих антител в случае применения интерферона β-1а или β-1b. В связи с этим при проведении лабораторной фармацевтической экспертизы качества препаратов интерферонов β, помимо подтверждения специфической биологической активности, должно быть установлено соответствие молекулы целевого белка заявленной структуре. На сегодняшний день международные и отечественные фармакопейные требования к оценке качества данных препаратов представлены не в полной мере. Формирование отечественных унифицированных требований позволит оптимизировать регистрационный процесс и послужит основой гармонизации отечественных и международных требований.
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.