A cDNA for Drosophila choline acetyltransferase (EC 2.3.1.6; ChAT) was fused with a polyhistidine sequence and expressed in Escherichia coli. The recombinant enzyme was purified to a specific activity of 500 mumol/min/mg of protein using metal affinity chromatography and ion exchange chromatography. Kinetic properties of the recombinant enzyme did not differ significantly from those previously determined. Circular dichroism (CD) spectra revealed that the secondary structure of the enzyme is largely alpha-helical. Intrinsic fluorescence spectra of the enzyme indicate that its tryptophan residues are buried. Neither CD nor fluorescence spectra changed significantly in the presence of substrates. The cysteine content of the recombinant Drosophila ChAT was determined to be 16 in the absence and 22 in the presence of 6 M guanidine hydrochloride. Finally, crystallization of recombinant Drosophila ChAT was achieved.
Das Pentaspirohenicosanol 6 reagiert mit Thionylchlorid in Pyridin unter WntTacher Cyclobutylmethyl-Cyclopentyl-Umlagerung zu einem all-cis-anellierten hexacyclischen Olefin 17, dessen Struktur und Konfiguration iiber eine Kristallstrukturanalyse eines hiervon abgeleiteten Epoxids 18 gekllrt wurde. Die Umlagerung ist konformativ kontrolliert und eine Synthese des [6.5]Coronans (5) geeignet. Der A k o h o l 6 wurde aus dem Trion 7 iiber eine Folge aus selektiver Dicyclopropylidenierung, erschbpfender Epoxydierung, Oxaspiropentan-Cyclobutanon-Urnlagerung, selektiver Reduktion und Addition von Methyllithium erhalten (7--+8--r10-+ 11+1246). Polycyclische Kohlenwasserstoffe, bei denen ein Zentralring der Kantenzahl m ( m = 4,6,8 ...) mit m peripheren Ringen der Kantenzahl n ( n = 3,4,5 ...) so verkniipft ist, dal3 jede Kante des Zentralringes zugleich Kante eines peripheren Ringes ist ([mnlCoronane). waren bisher nicht bekannt. Diese Verbindungen besitzen eine ungewohnliche Topologie und lassen interessante chemische und physikalisch-chemische Eigenschaften erwarten. Dies gilt insbesondere fur solche Systeme, die einen zentralen Sechsring enthalten. Beispiele sind C6.41Coronan ( 2 ) und C6.51Coronan (5). Schema 1 nu 1 2 3 4 5 6 -Cpscpde Rearrangemeate, 9Is? -Fivefold Cycloktylmetbyl-Cyclopeatyl Rearrangement in a Peataqiro-[3.0.3.0.3.0.3.0.3.1]~1 -A Key Sqoeoce for the SptBesis of [65]CoroanneThe pentaspirohenicosano16 reacts with thionyl chloride in pyri d h e to give, in a fivefold cyclobutylmethyl-cyclopentyl rearrangement, the all-cis annulated hexacyclic oleGn 17, whose structure and conformation was established by X-ray analysis of a n epoxide 18 derived therefrom. The rearrangement is conformationally controlled and suitable for the synthesis of [6.5]coronane (5). The 121~). Chem. Ber. 121, 525-531 (1988) VCH Verlagsgesellschaft mbH, D-6940 Weinheim, 1988 ooO9-2940/88/0303-0525 S 02.50/0
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