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A espécie Erythrina falcata Benth. (Fabaceae) é usada em sistemas agroflorestais, na restauração de florestas de mata ciliar, em locais sujeitos à inundação e na recuperação de ecossistemas degradados. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos do estresse hídrico na germinação de sementes de Erythrina falcata. O experimento foi realizado no Laboratório de Sementes Florestais da Universidade Federal do Paraná (UFPR) Paraná, Brasil. As unidades experimentais consistiram em caixas do tipo gerbox, contendo duas folhas de papel filtro e 25 sementes por caixa. Às folhas foi acrescido de 10 ml de cada solução osmótica. As caixas foram vedadas com parafilme e colocadas em câmaras de germinação do tipo Mangelsdorf, sob luz contínua à temperatura de 25±2 ºC. Testaram-se os seguintes potenciais osmóticos: 0.0;-0,2;-0,4;-0,6;-0,8 e-1,0 MPa para NaCl, manitol e PEG (6000). As sementes foram transferidas a cada dois dias para os mesmos potenciais osmóticos. A menor tolerância ao estresse hídrico foi observada simulando-o com PEG 6000. O limite para germinação está entre-0,2 e-0,4 MPa de PEG, enquanto que os potenciais osmóticos testados com NaCl e manitol não influenciaram o processo germinativo. Palavras-chave: corticeira; restrição hídrica; tolerância salina.

ABSTRACT

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The purpose of this research was Eucalyptus saligna in vitro regeneration and transformation with P5CSF129A gene, which encodes Δ 1 -pyrroline-5-carboxylate synthetase (P5CS), the key enzyme in proline biosynthesis. After selection of the most responsive genotype, shoot organogenesis was induced on leaf explants cultured on a callus induction medium (CI) followed by subculture on a shoot induction medium (SI). Shoots were subsequently cultured on an elongation medium (BE), then transferred to a rooting medium and finally transplanted to pots and acclimatized in a greenhouse. For genetic transformation, a binary vector carrying P5CSF129A and uidA genes, both under control of the 35SCaMV promoter, was used. Leaves were co-cultured with Agrobacterium tumefaciens in the dark on CI medium for 5 d. The explants were transferred to the selective callogenesis inducing medium (SCI) containing kanamycin and cefotaxime. Calli developed shoots that were cultured on an elongation medium for 14 d and finally multiplied. The presence of the transgene in the plant genome was demonstrated by PCR and confirmed by Southern blot analysis. Proline content in the leaves was four times higher in transformed than in untransformed plants while the proline content in the roots was similar in both types of plants.Additional key words: abiotic stress, in vitro culture, PCR, proline, Southern blot.

Breeding methods based on genetic transformation techniques need to be implemented for Eucalyptus camaldulensis to shorten the long breeding cycles and avoid manipulation of adult trees; that requires the development of plant regeneration protocols enabling development of plants from transformed tissues. The present work aimed to optimise the regeneration process already established for the species. Cotyledonary leaves of E. camaldulensis were cultured in MS medium supplemented with naphthaleneacetic acid (NAA) and 6-benzylaminopurine (BAP) combinations. The most efficient treatment for bud indirect regeneration (2.7 µmol L -1 NAA and 4.44 µmol L -1 BAP) was used for further experiments. When explants were kept in the dark during the first 30 days, the percentage of explants forming calluses increased and explant necrosis was reduced in comparison with light-cultured explants. Mineral medium modifications were compared and half-strength MS mineral medium turned out to be as efficient as full-strength medium, producing 54% and 47% of explants with buds, respectively. For shoot elongation, MS medium with halfstrength nitrate and ammonium salts, and 0.2% activated charcoal yielded rooted shoots 1 to 8 cm high after one month. The procedure is an efficient protocol for E. camadulensis plant regeneration, reducing the stages necessary for the obtention of complete plants. Key words: in vitro culture, forest species, culture media, organogenesis REGENERAÇÃO DE PLANTAS DE Eucalyptus camaldulensis A PARTIR DAS EXPLANTES COTILEDONARESRESUMO: A implementação, para espécies florestais, de técnicas de melhoramento baseadas em métodos de transformação genética, permitirá reduzir os longos ciclos de melhoramento e evitar a manipulação de árvores adultas. Isto implica dispor de um protocolo de regeneração que permita o desenvolvimento de plantas a partir de tecidos transformados. Este trabalho teve como objetivo otimizar este protocolo de regeneração para Eucalyptus camaldulensis. Folhas cotiledonares foram cultivadas em meio de cultura MS suplementado com combinações de ácido naftalenoacético (ANA) e 6-benzilaminopurina (BAP). O tratamento mais eficiente em termos de regeneração indireta de gemas foi 2,7 µmol L -1 de ANA combinado com 4,44 µmol L -1 de BAP, o qual foi utilizado nos experimentos posteriores. A manutenção dos explantes no escuro durante os trinta primeiros dias elevou a porcentagem de explantes com calos e reduziu a morte dos explantes, em comparação com os que permaneceram na luz. Modificações da composição mineral do meio MS foram comparadas e mostraram que a redução de metade dos sais foi tão eficiente para a formação de gemas (54% dos explantes) quanto o meio completo (47%). O meio de cultura com a concentração de íons nitrato e amônio reduzida à metade e 0,2% de carvão ativado apresentou-se adequado para o alongamento e enraizamento das brotações que atingiram uma altura de 1 a 8 cm depois de 30 dias. O processo completo representa um protocolo eficiente para a regeneração de plantas de Eucalyptu...

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The hybrid Eucalyptus grandis × Eucalyptus urophylla presents high levels of productivity and potential for use in paper, cellulose and fiber industries. The bud organogenesis from leaf explants of two clones of E. grandis × E. urophylla was studied in order to verify the effect of several factors: subculture duration on multiplication medium, type of explants, entire and half leaves: basal and apical portions, and duration of the culture on a regeneration medium. Differences in organogenic capacity of the two clones tested were observed. The explant most recommended for organogenesis is the basal section of the leaf collected from shoot clusters subcultured every 17 days. Moreover, the leaf explants must be transferred to a fresh bud induction medium every five days. This study also aimed at evaluating factors affecting the genetic transformation of leaf explants with the uidA gene, via co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens, such as the pre-culture of the explants on a specific medium, the duration of their co-culture with the bacteria and the addition of acetosyringone to the culture media. The best conditions for the expression of the uidA gene were two days of pre-culture of the leaf tissues, three days of co-culture with the bacteria and the addition of acetosyringone in pre-and co-culture media. Key words: Agrobacterium tumefaciens, micropropagation, tissue culture, transgenic plant, woody species Organogênese e transformação genética transiente do híbridoEucalyptus grandis × Eucalyptus urophylla RESUMO: O híbrido Eucalyptus grandis × Eucalyptus urophylla apresenta alta produtividade e potencial para indústrias de papel, celulose e fibras. A organogênese de explantes foliares de dois clones de E. grandis × E. urophylla foi estudada para verificar fatores como tempo de repicagem das plântulas matrizes em meio de multiplicação; tipo de explantes, folhas inteiras e de meias-folhas (porções basais e apicais) e dos dias que os explantes foliares permaneceram em meio de regeneração. Foram observadas diferenças na capacidade organogênica dos dois clones testados. A parte basal das folhas, coletadas de brotações repicadas a cada 17 dias, apresentou superioridade organogênica. Explantes foliares devem ser transferidos para novo meio de indução de brotações a cada cinco dias. Este estudo também teve como objetivo avaliar fatores que afetam a transformação genética de explantes foliares com o gene uidA, via co-cultivo com Agrobacterium tumefaciens, tais como a pré-cultura, a duração da co-cultura e a adição da acetoseringona no meio de cultura. As melhores condições para a expressão do gene uidA foram a cada dois dias de pré-cultura de explantes foliares, três dias de co-cultura com a bactéria e a adição de acetoseringona nos meios de pré e co-cultura.