The 100-fold purified RNA polymerase activity from human placenta is completely dependent upon added DNA. The enzyme is most active at 3 mM Mn 2+ in the presence of 100 mM (NI-I4)2 SO4. Denatured DNA is a better template than native DNA. 0~Amanitin completely inhibits the incorporation of ~H-UMP, while rifampicin has no influence upon the enzymatic activity.
Two RNA polymerase activities (RNA polymerase A and B) were solubilized by ammonium sulfate extraction of nuclei from human placenta. Both purified activities were completely dependent upon added DNA. RNA polymerase A was insensitive to -amanitin, whereas RNA polymerase B was inhibited by this compound. The enzymes differed in their responses to salt conditions. The template specificities of RNA polymerase B were studied using native and denatured DNA from different sources as well as synthetic double-stranded polydeoxynucleotides. Both denatured calf-thymus DNA and poly [d(i-C)-d(I-Q] were excellent templates. Several kinds of phage DNA were not used as templates unless denatured. The inhibitory effect of various semi-synthetic derivatives of rifamycin SV were investigated for possible inhibitory effects on RNA polymerase B. One of these compounds, AF/013, inhibited RNA synthesis at a concentration of 20 g/m/. Structural studies on RNA polymerase B indicated the presence of three large subunits with molecular weights of about 200000, 180000 and 150000. Lösliche RNA-Polymerase-Aktivitäten aus menschlicher Plazenta: Strukturelle und funktionelle Eigenschaften Zusammenfassung: Aus den Kernen der menschlichen Plazenta wurden durch Extraktion mit Ammoniumsulfat zwei RNA-Polymerase-Aktivitäten (RNA Polymerase A und B) gewonnen und gereinigt. Beide Aktivitäten waren völlig abhängig von zugesetzter DNA. RNA-Polymerase A war insensitiv gegenüber -Amanitin, während RNA-Polymerase B durch diese Verbindung inhibiert wurde. Beide Enzyme unterscheiden sich in ihrer Abhän-gigkeit von Salzkonzentrationen. Die Matrizen-Spezifität von RNA-Polymerase B wurde geprüft. Folgende Polynucleotide wurden untersucht: native und denaturierte DNA von verschiedenen Organismen, synthetische doppelsträn-gige Polydesoxynucleotide. Denaturierte Kalbsthymus-DNA und poly[d(I-C) · d(I-C)] waren ausgezeichnete Matrizen. Phagen-DNA stimulierte erst nach Denaturierung die RNA-Synthese. Der inhibierende Einfluß von einigen semisynthetischen Derivaten von Rifamycin SV auf die Aktivität der RNA-Polymerase B wurde getestet. Eine Verbindung aus dieser Reihe, Rifamycin AF/013, inhibierte die RNA-Synthese bei einer Konzentration von 20 g/m/. Untersuchungen über die strukturellen Eigenschaften der RNA-Polymerase B zeigten die Anwesenheit von mindestens drei Untereinheiten mit folgenden Molekulargewichten: 200000, 180000 und 150000.
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