Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is recognized as an important pathogen causing respiratory, reproductive, and neurological disorders in cattle and is associated with economic losses to animal industry. Accurate diagnostic methods are needed for prevention of disease transmission. While the virus neutralization test is considered the gold standard method, it requires maintenance of the virus and cell cultures, which is time consuming and expensive. Serological techniques such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are widely applied, as these are easy to perform and provide quick results. In the present study, a nanogold slot blot inhibition assay was developed for the serological diagnosis of BoHV-1 and compared with standard ELISA and horseradish peroxidase (HRP) slot blot assays. Of 42 serum samples tested by ELISA, 32 (76.2%) were positive and 10 (23.8%), were negative. The sensitivity and specificity of the nanogold slot blot inhibition assay was similar to that observed for ELISA and HRP slot blot assays, and a strong correlation was observed between the tests. Thus, the nanogold slot blot inhibition assay may serve as an efficient and rapid alternative to ELISA in settings, where plate-reading equipment is lacking.
RESUMO O teste imunocromatográfico de fluxo lateral, também chamado de teste rápido, tem sido uma ferramenta cada vez mais utilizada para o diagnóstico de uma vasta gama de alvos biológicos. Devido as suas características, esta plataforma é facilmente adaptada para uso em domicílio ou no campo, não necessitando de grandes recursos tecnológicos ou conhecimento técnico prévio, permitindo o monitoramento qualitativo, e ainda em alguns casos, quantitativo das amostras. Existem diferentes tipos de testes disponíveis comercialmente e a escolha do melhor formato está relacionada aos objetivos pretendidos, ou seja, o tipo de material a ser identificado, tais como antígenos, anticorpos ou qualquer outro material biológico ou químico. Diante disso, este trabalho teve como objetivo uma revisão ampla dos diferentes componentes dos testes imunocromatográficos, vantagens e desvantagens, sua aplicabilidade e avanços para o diagnóstico de doenças de interesse veterinário e humano, além da detecção de resíduos e contaminantes de produtos de origem animal.
RESUMOA expressão de peptídeos na superfície de bacteriófagos (phage display) foi descrita inicialmente em 1985. Desde então, moléculas recombinantes diferentes, tais como pequenos peptídeos ou fragmentos de anticorpos são expressos em proteínas externas de fagos, expandindo grandemente as aplicações desta técnica. Diferentes métodos de prospecção permitem o isolamento e caracterização in vitro ou in vivo de peptídeos ligantes a uma vasta gama de alvos biológicos. Este trabalho teve como objetivo uma revisão dos princípios da técnica de phage display e seu potencial como ferramenta importante para a caracterização de biomoléculas e suas aplicações no diagnóstico e na terapêutica de doenças de interesse veterinário. PALAVRAS-CHAVE: Bibliotecas de peptídeos, diagnóstico, doenças veterinárias, terapêutica. PHAGE DISPLAY AND THEIR APPLICATION IN VETERINARY MEDICINE ABSTRACTThe phage display technology was first described in 1985. Since that time, different recombinant molecules, such as small peptides or antibody fragments are displayed on the surface of filamentous phage proteins, expanding greatly the applications of this technique. Different prospection methods allow the isolation and characterization, whether in vitro and in vivo, of peptides that are reactive to a wide range of biological targets. This paper aims to review the principles of the phage display technique and its potential as an important tool for the characterization of biomolecules and their applications in the diagnosis and therapy of veterinary diseases.
Resumo:As doenças respiratórias estão entre as mais prevalentes na produção de suínos e são causadas por uma série de fatores infecciosos, ambientais, sanitários e de manejo, estimando-se portanto as perdas econômicas de uma granja de suínos afetados pelo um surto de pneumonia enzoótica. A Mycoplasma hyopneumoniae (Mh) é reconhecido como um dos patógenos respiratórios mais importantes na suinocultura mundial, pois além de prejudicar a eficiência da produção é responsável pela elevação dos custos de produção, fato desigando em nosso relato de caso. A infecção caracterizase por uma broncopneumonia catarral que, clinicamente, manifesta-se por tosse seca, atraso no ganho de peso, alta morbidade, baixa mortalidade e, geralmente, cursa com complicações broncopulmonares purulentas no intuito de identificar-se a melhor relação custo-benefício da implementação e/ou aprimoramento de programas sanitários e de biossegurança específicos, que visem evitar ou pelo menos mitigar as perdas potenciais associadas aos surtos.Palavras-chave: biossegurança, prejuízo econômico, pneumonia enzoótica Abstract: Respiratory diseases are among the most prevalent in swine production and are caused by a number of infectious, environmental, health and management, estimating therefore the economic losses of a pig farm affected by an outbreak of enzootic pneumonia. The Mycoplasma hyopneumoniae (Mh) is recognized as one of the most important respiratory pathogens in the swine industry worldwide, as well as
The specificity of monoclonal antibodies (mAbs) to desired targets makes these molecules suitable for therapeutic and diagnostic uses against a wide range of pathogens. Phage display antibody libraries offer one method by which mAbs can be selected for, without the use of conventional hybridoma technology. In this work, phage display technology was used to construct, select and characterize a combinatorial single chain fragment variable (scFv) antibody library against bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) from the immune repertoire of chickens immunized with the virus. In silico analysis of the hypervariable domains of the antibody heavy chains revealed a high frequency of scFv fragments with low variability, suggesting that selection had probably been carried out and favored by a few immunogenic viral antigens. The reactivity of the scFv fragments selected against BoHV-1 was demonstrated by Phage-ELISA. A significant increase in antibody reactivity to the target was observed after six rounds of library selection, showing its potential use as a molecule for BoHV-1 diagnosis. The strategy described here opens up a field for the use of phage display as a tool for selection of monoclonal antibodies that could be used for theranostic applications against infectious and parasitic diseases of veterinary interest. Key words: Antibody engineering. BoHV-1. Diagnosis. ScFv library. ResumoA especificidade dos anticorpos monoclonais (mAb) aos alvos desejados torna estas moléculas adequadas para uso em diagnóstico ou terapia de uma vasta gama de agentes patogênicos. Biblioteca de anticorpos apresentados em fagos filamentosos é uma metodologia para a produção de mAbs, podendo ser utilizada como alternativa à tecnologia de hibridoma convencional, tradicionalmente empregada para este fim. Neste trabalho, a tecnologia de Phage display foi usada para construir, selecionar e caracterizar uma biblioteca combinatorial de fragmentos de anticorpos de cadeia única (scFv) contra o Herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) a partir do repertório imune de galinhas imunizadas com o vírus. A análise in silico dos
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