Introducción. La sífilis es una enfermedad producida por Treponema pallidum subespecie pallidum cuya incidencia mundial es de 12 millones de casos por año, aproximadamente; de estos, más de dos millones se presentan en mujeres gestantes, siendo la sífilis congénita la complicación más grave de esta infección en el embarazo.Objetivo. Detectar la presencia de T. pallidum subespecie pallidum en muestras clínicas para el diagnóstico de sífilis congénita mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) anidada y determinar su concordancia con las pruebas serológicas.Materiales y métodos. Mediante PCR convencional y anidada, se amplificaron tres genes diana (polA, 16S ADNr y TpN47) y se confirmaron los productos de amplificación de los genes TpN47 y polA por secuenciación. Las pruebas serológicas empleadas fueron la VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), la de reagina plasmática rápida (Rapid Plasma Reagin, RPR) y la de aglutinación de partículas para Treponema pallidum (Treponema pallidum Particle Agglutination Assay, TPPA).Resultados. La sensibilidad para la PCR convencional fue de 52 pg y, para la PCR anidada, de 0,52 pg. La especificidad con los iniciadores TpN47 y polA fue de 100 %; los resultados de la secuenciación mostraron una identidad de 97 % con T. pallidum. En 70 % de las muestras, los resultados de las pruebas serológicas y la PCR anidada concordaron.Conclusión. El gen TpN47 resultó ser el mejor blanco molecular para la identificación de T. pallidum. La PCR anidada se presenta como una alternativa de diagnóstico molecular promisoria para el diagnóstico de sífilis congénita.
El diagnóstico de COVID-19 se basa tanto en aspectos clínicos como en pruebas de detección, pero los síntomas y signos clínicos de los pacientes infectados son altamente atípicos y, por lo tanto, las pruebas moleculares son indispensables para su diagnóstico. La reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-qPCR) se lleva a cabo en laboratorios nivel BSL II; asimismo, los principales blancos moleculares para la detección viral son el gen E (envoltura), y el gen RdRP (ARN polimerasa dependiente de ARN). Los falsos negativos en este diagnóstico se deben a la calidad y cantidad de la muestra, condiciones de transporte, almacenamiento, y manejo de estas antes y después de la extracción (el ARN es termolábil y abundantes las RNasas), fase de la infección, mutaciones del virus y presencia de inhibidores de la PCR. En estos casos, se recomienda una nueva toma de muestra, especialmente de vías respiratorias bajas, para aumentar la carga viral. Se debe tener en cuenta la sensibilidad analítica de la RT-qPCR (5,2 copias de ARN/reacción) y que, una vez el RNA se extrae, se va degradando progresivamente afectando la sensibilidad diagnóstica de la prueba. Un diagnóstico oportuno permite optimizar el manejo (aislamiento y tratamiento) y monitorización de los pacientes, así como la aplicación de medidas de prevención y control de la expansión, y la vigilancia epidemiológica de la enfermedad.
Se emplearon quistes liofilizados de Cisticerco cellullosae para preparar un extracto antigénico, el cual se utilizó en la identificación de antígenos de Taenia soliumreconocidos por inmunoglobulinas G de pacientes con cisticercosis, por medio de la prueba de inmunoelectrotransferencia (EITB). Se estudiaron 193 muestras (105 líquidos cefalorraquídeos - LCR y 88 sueros) de individuos con diagnóstico de cisticercosis por hallazgos clínicos, epidemiológicos y serológicos mediante el inmunoensayo enzimático (ELISA). El análisis de las proteínas antigénicas por electroforesis, permitió identificar polipéptidos de 29, 45, 66, 96 y 116 kDa principalmente, así como también algunos menores de 29 kDa. Los de mayor frecuencia de aparición en muestras de suero y LCR fueron los de 29, 45 y 66 kDa. Por lo tanto, estos antígenos inmunodominantes, podrían emplearse con predilección en estudios epidemiológicos y clínicos de cisticercosis por western blot.
<p>La biopelícula como un mecanismo de virulencia en Staphylococcus involucrada en infecciones intrahospitalarias es regulada por un represor negativo, responsable de la transcripción completa del operón. La búsqueda de dominios funcionales por modulación computacional de permitió hallar las secuencias peptídicas con actividad biológica análoga a la proteína <em>ica</em>R. Mediante biología computacional se diseñaron péptidos empleando el programa de predicción AntiBP (http: //www. imtech.res.in/ raghava/antibp/); la síntesis química se hizo por N<sup>α</sup>-Fmoc y se caracterizaron y purificaron tres moléculas por RP-HPLC y MALDI-TOF. Se evaluó su seguridad biológica mediante ensayo de actividad citotóxica realizada sobre macrófagos murinos de la línea J774 y la actividad hemolítica se determinó mediante el uso de glóbulos rojos. Los tres péptidos caracterizados IR1, IR2 e IR3, presentaron estructura secundaria predominantemente alfa helicoidal, alto grado de pureza y alto score antimicrobiano; además, mostraron baja toxicidad, evidenciada por la actividad citotóxica y hemolítica en las concentraciones ensayadas y en comparación con los controles usados, que permitiría su potencial uso como moléculas candidatas o principios activos con actividad análoga al represor nativo, frente a la biopelícula de los Staphylococcus.</p>
Fungal infections have increased in recent decades with considerable morbidity and mortality, mainly in immunosuppressed or admitted-to-the-ICU patients. The fungal resistance to conventional antifungal treatments has become a public health problem, especially with Candida that presents resistance to several antifungals. Therefore, generating new alternatives of antifungal therapy is fundamental. One of these possibilities is the use of antimicrobial peptides, such as LL-37, which acts on the disruption of the microorganism membrane and promotes immunomodulatory effects in the host. In this study, we evaluated the in vitro antifungal activity of the LL-37 analogue peptides (AC-1, LL37-1, AC-2, and D) against different Candida spp. and clinical isolates obtained from patients with vulvovaginal candidiasis. Our results suggest that the peptides with the best ranges of MICs were LL37-1 and AC-2 (0.07 µM) against the strains studied. This inhibitory effect was confirmed by analyzing the yeast growth curves that evidenced a significant decrease in the fungal growth after exposure to LL-37 peptides. By the XTT technique we observed a significant reduction in the biofilm formation process when compared to yeasts untreated with the analogue peptides. In conclusion, we suggest that LL-37 analogue peptides may play an important antimicrobial role against Candida spp.
Se probaron métodos de marcación radioactivos dentro de los cuales el sistema Random Primers resultó mejor que el de Nick Translation. Se obtuvieron sondas con mayor actividad especifica (1-2X1O9dpmIug) y una sensibilidad 10 veces mayor en la detección de ADN de Plasmodium falciparum. La sensibilidad alcanzada (12pg) obtenida con la sonda PFCOL692 desarrollada y caracterizada en nuestro laboratorio, fue igual a la obtenida con la sonda pRepHind, una de las más utilizadas en los laboratorios de otros paises. El método de marcación no radioactivoconfotobiotina mostróventajassobrela marcación porNickTranslation con nucleótidos biotinilados y se alcanzó una sensibilidad de 135 pg de ADN de P. falciparum.También se probóunsistema degeneración deseñalesfluorescentes mediante el empleo de proteasas, y los resultados preliminares muestran sus posibilidades como método de detección.KEYWORDS: Probes, nick translation, random primers, biotin, photobiotin, enterokinase, P. falciparum, P. vivax. INTRODUCCIONComo sondas se han utilizado secuencias repetitivas que tienen un alto número de copias El diagnóstico eficiente y rápido es el primer por genoma (6). una de estas deno. paso importante en el control epidemiológico de minadaDReDHind, re~ortada ~o r Franzen (7). se . , la malaria (1). Este diagnóstico generalmente se ha usadoen varios en'sayos (*.12) y ha res;ljado hace mediante la identificación microscópica de de gran utilidad en de hibridización para parásitos en sangre. El examen microscópico detectar p. falciparum, ~~~b i é~, se emplean tiene limitaciones que se hacen más evidentes sondas que detectan A R N~ (13.75), que es el en estudios de tipo epidemiológico, que requie-, ás abundante de los constituyentes de los ren el examen de gran cantidad de m uestr as. ácidos nucleicos en organismos no virales, sienPara superar esta condición, se han sugerido d o un buen blanco para diagnóstico (16). varias alternativas (2-4), dentro de las cuales está el diseno de sondas, que hacen posible Teniendo en cuenta que cada vez más se detectar el ADN del parásito mediante procedi-sugiere la necesidad de utilizar sondas para mientos de hibridización molecular. El método de diagnóstico, en este trabajo se evaluaron méto-marcación de estas sondas dependerá de los dos de marcación radioactivos y no radiactivos, niveles de sensibilidad y especificidad que se empleados en la producción de sondas para requieran en el estudio (5).diagnóstico anivel epidemiológicode P. falciparum
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