Recebido em 21/3/00; aceito em 6/7/00 FLOW SYSTEM FOR SPECTROPHOTOMETRIC UREA DETERMINATION IN ANIMAL BLOOD PLASMA EMPLOYING LEGUMINOUS PLANT AS NATURAL UREASE ENZYME SOURCE. A spectrophotometric flow injection analysis (FIA) procedure employing natural urease enzyme source for the determination of urea in animal blood plasma was developed. Among leguminous plants used in the Brazilian agriculture, the Cajanus cajan specie was selected as urease source considering its efficiency and availability. A minicolumn was filled with leguminous fragments and coupled to the FIA manifold, where urea was on-line converted to ammonium ions and subsequently it was quantified by spectrophotometry. The system was employed to determine urea in animal plasma samples without any prior treatment. Accuracy was assessed by comparison results with those obtained employing the official procedure and no significant difference at 90 % confidence level was observed. Other profitable features such as an analytical throughput of 30 determinations per hour, a reagent consumption of 19.2 mg sodium salicylate, 0.5 mg sodium hipochloride and a relative standard deviation of 1.4 % (n= 12) were also obtained.Keywords: urea determination, leguminous plant urease source, flow analysis, animal blood plasma Artigo Quim. Nova, Vol. 24, No. 2, 191-194, 2001.
INTRODUÇÃOA determinação de uréia em fluidos biológicos é um importante parâmetro para diagnósticos clínicos do funcionamento renal, além de ser um dos indicativos da condição nutricional dos animais 1 . Em vista disso, métodos empregando variadas técnicas de detecção 2-7 , têm sido propostos no intuito de simplificar e aumentar a sensibilidade na determinação desse analito. Na grande maioria destes métodos 4-7 , sejam eles espectrofotométricos, potenciométricos, condutométricos ou amperométricos, a enzima urease tem sido empregada, na forma de solução, ou imobilizada em pequenos reatores. Nesses casos, a uréia é hidrolisada produzindo amônio, que é então monitorado direta ou indiretamente, dependendo da técnica de detecção empregada.O emprego de reações enzimáticas em química analítica tem sido amplamente explorado, principalmente devido à sensibilidade e alta seletividade de tais reações 8 . Os procedimentos analíticos empregam soluções de enzima purificada ou a mesma imobilizada em suportes apropriados, como esferas de vidro com porosidade controlada, celulose, fibras de nylon entre outros 9 . A escolha do suporte depende da enzima envolvida, bem como da forma com que esta será imobilizada. Em geral, enzimas imobilizadas apresentam uma maior estabilidade, maior eficiência e menor custo, quando comparadas ao emprego de enzimas em solução, e por esta razão, tem crescido o núme-ro de trabalhos empregando enzimas imobilizadas ou sugerindo metodologias para imobilização das mesmas 7 . Uma outra maneira de se utilizar enzimas é empregando fontes naturais das mesmas 10 , nas quais algumas enzimas apresentam-se naturalmente disponíveis. Com relação à enzima urease, selecionada para o desenvolvimento des...