The objective of this study was to evaluate the aerobic rumen mycobiota from three age groups of Nelore beef cattle reared extensively on lignified pasture. The experiment was randomized and sampled 50 steers, 50 cows, and 50 calves grazed on Brachiaria spp. pasture during the dry season. Rumen fluid in all animals was aromatic, slightly viscous, and greenish-brown in color. Microscopic examination revealed monocentric and polycentric anaerobic fungi in similar proportions (P > 0.05) in the rumen fluid of cows and steers. However, these microorganisms were not identified in any of the samples from calves. In culture exams, aerobic filamentous population was significantly higher for rumen fluid of cows compared to the other two groups. Microculture and rDNA sequence analyses showed Aspergillus spp. as the most frequent aerobic fungus among the isolates from the three bovine groups evaluated. Biochemical profiles were determined by the growth level of yeast isolates with 44 nutrient sources. Ten different yeast profiles were obtained, and yeast isolates from cow ruminal fluid showed ability to catabolize greater diversity of carbon and nitrogen sources. The differences in the fungal populations observed in this study could be explained by microbial and physiological interactions existing in the ruminal ecosystem of each age bovine group. The present study showed the fungal population of the rumen related with differences among age of cattle raised in lignified pastures. Metabolic capabilities of mycelial fungi or yeast identified in this study may be employed in new probiotics or microbial additives for different bovine categories.

RESUMO Este estudo avaliou a contaminação por ovos de helmintos, cistos e oocistos de protozoários em compostos

Fungi have the ability to degrade vegetal cell wall carbohydrates, and their presence in the digestive tract of ruminants can minimize the effects of lignified forage on ruminal fermentation. Here, we evaluated enzyme production by Aspergillus spp. isolates from the digestive tracts of cattle grazed in tropical pastures during the dry season. Filamentous fungi were isolated from rumen and feces by culture in cellulose-based medium. Ninety fungal strains were isolated and identified by rDNA sequence analysis, microculture, or both. Aspergillus terreus was the most frequently isolated species, followed by Aspergillus fumigatus. The isolates were characterized with respect to their cellulolytic, xylanolytic, and lignolytic activity through qualitative evaluation in culture medium containing a specific corresponding carbon source. Carboxymethyl cellulase (CMCase) activity was quantified by the reducing sugar method. In the avicel and xilan degradation test, the enzyme activity (EA) at 48 h was significantly higher other periods (P < 0.05). Intra- and inter-specific differences in EA were verified, and high levels of phenoloxidases, which are crucial for lignin degradation, were observed in 28.9% of the isolates. Aspergillus terreus showed significantly higher EA for avicelase (3.96 ±1.77) and xylanase (3.13 ±.091) than the other Aspergillus species at 48 h of incubation. Isolates AT13 and AF69 showed the highest CMCase specific activity (54.84 and 33.03 U mg-1 protein, respectively). Selected Aspergillus spp. isolates produced remarkable levels of enzymes involved in vegetal cell wall degradation, suggesting their potential as antimicrobial additives or probiotics in ruminant diets.

-The objective of this study was to evaluate the aerobic microbiota of the rumen fluid from Holstein cows and heifers fed different tropical forage in the north of Minas Gerais, Brazil. A total of 30 samples of rumen fluid from cows fed with sorghum silage were collected: 32 from cows fed Brachiaria brizantha, 12 from heifers that received sorghum silage and 11 from calves fed sugar cane foliage. The culture was carried out using the agar Sabouraud medium and the solid C medium, containing microcrystalline cellulose. The isolated mycelial fungi were identified by microculture technique and yeasts by micromorphological and physical-chemical analysis. Specific identification for yeasts was confirmed by ribosomal DNA sequence analysis. The presence of fungal colonies was confirmed on the Sabouraud medium for 100% of the samples. No significant differences were observed comparing the concentrations of mycelia fungi in the rumen fluid from cows fed different forages and for the two categories evaluated, fed sorghum silage. Yeast populations in the rumen fluid from heifers fed sugarcane were higher compared with those receiving sorghum silage. The yeast Pichia kudriavzevii (Candida krusei) was the most frequent and among the mycelial fungi, the genus Aspergillus was the most frequently observed, corresponding to 56% of the samples. Future studies should elucidate the variations in the populations of these microorganisms considering the carbohydrate sources in the tropical forages and the animal categories. The ecological or pathogenic role of these microorganisms should also be considered, aiming at improved productivity and health of cattle.

RESUMOProtozoários do rúmen podem representar 40% do nitrogênio total e 60% do produto final da fermentação e apresentam atividade celulolítica. Neste estudo, objetivouse quantificar e identificar as populações de protozoários no rúmen de novilhos, criados exclusivamente em pastagem, durante o período seco do ano, no Norte de Minas Gerais. Amostras do suco ruminal de 36 novilhos mestiços Nelore foram coletadas diretamente do rúmen, após o abate, durante o inicio, meio ou fim do período de estiagem. Para conservação dos protozoários, 1 mL do suco ruminal foi diluído em 9 mL de solução de formaldeido a 10%. Posteriormente, foram realizadas diluições decimais em solução salina e contagem de protozoários pequenos, médios e grandes em câmara de Sedgewick Rafter. As concentrações de protozoários foram transformadas em log10 (x+1) e submetidas à análise de variância e as médias comparadas com teste de Duncan. As frequências dos gêneros foram comparadas com o teste do qui-quadrado. As médias da concentração total e de pequenos e médios protozoários diminuíram significativamente com o decorrer do período seco; entretanto, os grandes protozoários não apresentaram alterações na concentração média durante os três períodos avaliados. Foram identificados 7749 protozoários, pertencentes a 17 gêneros diferentes. Observou-se que os gêneros Charonina e Entodinium apresentaram alta ocorrência no início, meio e final do período da seca (p<0,05), indicando a participação desses ciliados em bovinos alimentados exclusivamente a pasto, durante esse período do ano.PALAVRAS-CHAVE: Brachiaria spp., ciliados, microbiota ruminal, pecuária de corte, semiárido. RUMEN PROTOZOA OF STEERS RAISED ON TROPICAL PASTURE DURING DRY SEASON ABSTRACTProtozoa of the rumen can represent 40% of total nitrogen and 60% of the final product of fermentation and it has cellulolytic activity. This study aimed to quantify and identify the ruminal protozoa populations from steers, raised exclusively on pastures during the dry season in the north of Minas Gerais, Brazil. Samples of ruminal fluid of 36 Nellore steers were collected directly from the rumen immediately after slaughter, during the early, middle or end of the dry season. For protozoa conservation, 1 mL of ruminal fluid was diluted in 9 mL of 10 % formaldehydes solution. Decimal dilutions were made in saline and the counting of small, medium and large protozoa was

RESUMO Objetivou-se, com a presente pesquisa, avaliar a viabilidade de Aspergillus spp. com potencial probiótico durante o armazenamento e diante da pressão da microbiota autóctone, bem como a tolerância aos principais ácidos graxos da fermentação ruminal. Verificou-se também a inocuidade micotoxicológica desses isolados fúngicos cultivados em meio de cultivo sólido. Foram avaliados 20 isolados de Aspergillus spp., provenientes do trato gastrointestinal de bovinos criados em Urochloa decumbens lignificada. Esses fungos foram identificados por análise de sequências do DNAr e foram selecionados por apresentarem expressivo potencial celulolítico. O método vapor de amônia foi utilizado para detecção de cepas produtoras de micotoxinas. Os isolados foram avaliados quanto à viabilidade de crescimento em fluido ruminal por até 96 horas e estocagem em condições ambientais. Observou-se que os fungos avaliados não produziram aflatoxinas e que 95% dos isolados apresentaram resistência aos ácidos ruminais. Dois isolados, selecionados a partir das análises anteriores, apresentaram viabilidade sob a pressão da microbiota autóctone e de metabólitos do ecossistema ruminal e permanecem viáveis por, no mínimo, dois anos. Conclui-se que os isolados do gênero Aspergillus selecionados nesta pesquisa apresentam características fisiológicas para serem utilizados com aditivos microbianos ou probióticos para o ambiente ruminal.

Comunicação [Communication] Leveduras no rúmen de caprinos e bovinos de corte criados em pastagem tropicais [ Em diferentes países em todo o mundo, tem-se caracterizado a microbiota ruminal e registrado a importante participação dos fungos na digestão e no equilíbrio do ecossistema ruminal e na saúde dos ruminantes. Entretanto, pouco se tem estudado sobre a caracterização e participação de fungos aeróbios em animais criados em condições extensivas, pastagens de baixo valor nutricional, frequentemente lignificadas. Pesquisas relacionadas ao ambiente ruminal de animais nessas circunstâncias permitiriam a seleção de isolados fúngicos com atividade superior de enzimas celulolíticas e xilanolíticas, importantes na degradação da parede celular vegetal. Culturas microbianas vivas dos fungos aeróbiosAspergillus orizae e Sacchariomyces cerevisae e de seus respectivos extratos têm sido utilizadas como suplementos alimentares para ruminantes em escala comercial, com evidentes resultados positivos. Alguns estudos têm demonstrado que esses aditivos microbianos podem melhorar a produtividade de ruminantes em cerca de 7 a 8% (Martin e Nisbet, 1992;Wallace, 1994 A redução do azul de metileno apresentou variações de dois a cinco minutos nos caprinos e de sete a 32 minutos nos bovinos. Como as duas espécies de ruminantes avaliadas recebiam dietas semelhantes, essa diferença no tempo de redução do azul de metileno poderia ser justificada pelo maior tempo de jejum em que os bovinos se encontravam, o que proporcionou redução na concentração das enzimas redutoras. Estudos mostram que a dieta fornecida para os animais influencia diretamente na redução do azul de metileno.Segundo Dirksen (1993), uma dieta com elevada proporção de concentrado provoca redução de apenas um minuto, e uma dieta constituída exclusivamente de feno pode levar à redução de três a seis minutos. O tempo de redução do azul de metileno prolonga-se para até mais de 15 minutos na inatividade simples da microbiota em animais alimentados com dietas pobres em energia e proteína ou com inapetência prolongada (Dirksen, 1993 Dirksen (1993). O ponto ótimo da digestão da fibra é dado quando valores de pH se encontram entre 6,7 e 7,1. Em situações em que o pH atinge valores abaixo de 6,2, ocorre redução na digestibilidade da fibra, pois os microrganismos celulolíticos são sensíveis a baixos valores de pH (Orskov, 1988).No cultivo, foi observado crescimento de leveduras em todas as amostras provenientes dos caprinos, em uma concentração média de 3,2x10 5 unidades formadoras de colônias (UFC) por mL de suco amostrado. Diferentemente, nas amostras dos novilhos, não foi observado o crescimento de leveduras para nenhum dos cultivos. Fungos micelianos aeróbios estavam ausentes no cultivo do líquido ruminal para as duas espécies estudadas.Até o presente momento, não se sabe o motivo da variação entre a microbiota fúngica de caprinos e novilhos, já que ambos receberam dietas semelhantes, a coleta do suco do rúmen foi realizada no mesmo período do ano e os animais originaram-se de ...

ABSTRACT