ResumoForam avaliados os efeitos do tempo sobre o metabolismo oxidativo e a fagocitose de Escherichia coli, em amostras de polimorfonucleares (PMN) do sangue, de cinco bezerros hígidos, conservadas em banho de gelo por duas (t2), quatro (t4), seis (t6), 12 (t12) e 24 (t24) horas. O metabolismo oxidativo foi avaliado utilizando o Diacetato 2' 7' Diclorofluoresceína (DCFH-DA) e a E. coli, como estímulo. Para a fagocitose a mesma bactéria foi utilizada. As amostras foram analisadas por citometria de fluxo. O metabolismo oxidativo basal dos PMN do sangue de bezerros foi maior nos tempos t4, t6 e t12, do que em t2 (p<0,05). A intensidade de fluorescência do metabolismo oxidativo induzido pela bactéria foi maior nos tempos t4 e t6 do que em t2 (p<0,05). A comparação entre o metabolismo basal e induzido pela bactéria, em cada um dos tempos, mostrou que a maior diferença ocorreu em t2, com valores da média geométrica e desvios padrão respectivos de 18,3 ± 4,4 e 26,7 ± 1,8 (p< 0,05). A atividade de fagocitose, medida pela intensidade de fluorescência, foi maior para as amostras mantidas em gelo por 6 horas do que para t2, t4 e t12 (p<0,05). O percentual de fagocitose não diferiu entre os tempos. O tempo ideal para análise do metabolismo oxidativo foi o de duas horas. Maiores estudos são necessários para se verificar a influência do tempo de conservação na fagocitose de E. coli por PMN do sangue de bovinos.
IntroduçãoA citometria de fluxo é uma técnica emergente na Medicina Veterinária que permite uma análise rápida e objetiva de células em suspensão. 1 Esta técnica, muito utilizada na avaliação da função de polimorfonucleares (PMN) do sangue em várias espécies animais e no homem, oferece uma análise quantitativa de uma variedade de tipos celulares baseada no tamanho da célula, complexidade molecular e composição antigênica. Assim, este método de análise complementa e amplia os conhecimentos obtidos com a microscopia óptica. 2 A avaliação funcional dos PMN do sangue é normalmente realizada através da mensuração do metabolismo oxidativo e da atividade de fagocitose destas células. 3 As amostras de sangue devem ser processadas e analisadas o mais breve possível, já que o processo de estocagem da amostra é um ponto chave na obtenção de resultados precisos, sendo recomendado que as amostras sejam refrigeradas e processadas dentro de quatro horas após a colheita de sangue a fim de se evitar resultados falsos ou inconclusivos. 2 Segundo Vuorte, Jansson e Repo 4 , na oxidação do Diacetato 2' 7' Diclorofluoresceína (DCFH), a manutenção da integridade de membrana e da viabilidade celular em todos os estágios de preparação das células é essencial para se evitar a saída do substrato ou de seus derivados
