Efeito do tempo de conservação de polimorfonucleares do sangue de bezerros sobre o metabolismo oxidativo e a atividade de fagocitose de Escherichia coli

Abstract

ResumoForam avaliados os efeitos do tempo sobre o metabolismo oxidativo e a fagocitose de Escherichia coli, em amostras de polimorfonucleares (PMN) do sangue, de cinco bezerros hígidos, conservadas em banho de gelo por duas (t2), quatro (t4), seis (t6), 12 (t12) e 24 (t24) horas. O metabolismo oxidativo foi avaliado utilizando o Diacetato 2' 7' Diclorofluoresceína (DCFH-DA) e a E. coli, como estímulo. Para a fagocitose a mesma bactéria foi utilizada. As amostras foram analisadas por citometria de fluxo. O metabolismo oxidativo basal dos PMN do sangue de bezerros foi maior nos tempos t4, t6 e t12, do que em t2 (p<0,05). A intensidade de fluorescência do metabolismo oxidativo induzido pela bactéria foi maior nos tempos t4 e t6 do que em t2 (p<0,05). A comparação entre o metabolismo basal e induzido pela bactéria, em cada um dos tempos, mostrou que a maior diferença ocorreu em t2, com valores da média geométrica e desvios padrão respectivos de 18,3 ± 4,4 e 26,7 ± 1,8 (p< 0,05). A atividade de fagocitose, medida pela intensidade de fluorescência, foi maior para as amostras mantidas em gelo por 6 horas do que para t2, t4 e t12 (p<0,05). O percentual de fagocitose não diferiu entre os tempos. O tempo ideal para análise do metabolismo oxidativo foi o de duas horas. Maiores estudos são necessários para se verificar a influência do tempo de conservação na fagocitose de E. coli por PMN do sangue de bovinos. IntroduçãoA citometria de fluxo é uma técnica emergente na Medicina Veterinária que permite uma análise rápida e objetiva de células em suspensão. 1 Esta técnica, muito utilizada na avaliação da função de polimorfonucleares (PMN) do sangue em várias espécies animais e no homem, oferece uma análise quantitativa de uma variedade de tipos celulares baseada no tamanho da célula, complexidade molecular e composição antigênica. Assim, este método de análise complementa e amplia os conhecimentos obtidos com a microscopia óptica. 2 A avaliação funcional dos PMN do sangue é normalmente realizada através da mensuração do metabolismo oxidativo e da atividade de fagocitose destas células. 3 As amostras de sangue devem ser processadas e analisadas o mais breve possível, já que o processo de estocagem da amostra é um ponto chave na obtenção de resultados precisos, sendo recomendado que as amostras sejam refrigeradas e processadas dentro de quatro horas após a colheita de sangue a fim de se evitar resultados falsos ou inconclusivos. 2 Segundo Vuorte, Jansson e Repo 4 , na oxidação do Diacetato 2' 7' Diclorofluoresceína (DCFH), a manutenção da integridade de membrana e da viabilidade celular em todos os estágios de preparação das células é essencial para se evitar a saída do substrato ou de seus derivados

Assessment of the oxidative metabolism of calves’ bronchoalveolar cells: comparison between NBT and fluorimetric techniques

“…These differences were also found by BOHLAND et al (2008), who justified that in the stimulated oxidative metabolism, the use of bacteria simulated an in vitro infection, and that phagocytosis is required to trigger the oxidative metabolism, thus leading to a more reliable result for a natural infection. In the basal test, the oxidative metabolism is spontaneous and leads to more variability of results, as well as a higher average standard error, which culminated in the lack of statistical difference for this variable.…”

“…FI indicates the number of fluorescent particles within each cell (BOHLAND et al, 2008); therefore, it may be noted that in M2, the AM produced ROS under stimulation at higher amounts, as compared to M1. However, the reduction in the percentage of AM producing stimulated ROS in this same moment was confirmed.…”