RESUMO.-[Influência do Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) sobre a sobrevivência e o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais capri-nos.] O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do fator de crescimento semelhante a insulina-I (IGF-I) na sobrevivência, ativação (transição de folículos primordiais para primários) e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro. Fragmentos de córtex ovariano foram cultivados por um e sete dias na ausência ou presença de IGF-I (0, 50 e 100ng/mL). Os tecidos não cultivados e cultivados foram processados e analisados por histologia e microscopia eletrônica de transmissão. O cultivo por um dia em meio com 100ng/mL de IGF-I apresentou 86,7% de folículos morfologicamente normais. Estes resultados foram semelhantes (P>0,05) ao percentual de folículos normais encontrados no controle (96,7%). Verificou-se ainda que este meio aumentou o percentual de ativação folicular (folículos em desenvolvimento) com um dia de cultivo. Os diâ-metros ovocitário e folicular mantiveram-se semelhantes ao controle ao cultivar por um dia em meio contendo 100ng/ The aim of this study was to investigate the effects of the insulin-like growth factor -I (IGF-I) on survival, activation (transition from primordial to primary follicles) and growth of caprine preantral follicles cultured in vitro. Fragments of ovarian cortex were cultured for one and seven days in the absence or presence of IGF-I (0, 50 and 100ng/ml). The non--cultured and cultured tissues were processed and analyzed by histology and transmission electron microscopy. The culture for one day in a medium with 100ng/ml of IGF-I showed 86.7% of morphologically normal follicles. These results were similar (P>0.05) to the percentage of normal follicles found in the control (96.7%). It was also found that this medium increased the percentage of follicular activation (developing follicles) with one day of culture. The oocyte and follicular diameters remained similar to the control by culturing for one day in a medium containing 100ng/ml of IGF-I. The ultrastructural analysis did not confirm the integrity of the follicular fragments in a medium containing IGF-I (100ng/ml) after one and seven days of culture. In conclusion, this study demonstrated that the addition of 100 ng/ml of IGF-I in the culture medium enables the development of preantral follicles of goats with one day of culture. However, it is not sufficient to maintain the follicular integrity and the follicular survival rate after seven days of culture.

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RESUMO O Brasil atualmente é detentor do terceiro maior rebanho de vacas leiteiras do mundo, composto, em sua maioria, de animais mestiços F1 (Gir X Holandês), os quais são bem adaptados às áreas tropicais. O objetivo do presente estudo foi investigar a eficiência da ovum pick-up (OPU) e da produção in vitro de embriões oriundos de doadoras Girolando com sêmen sexado de touros provenientes de duas raças, Gir e Holandesa. Foram utilizados dados referentes a 232 animais de diversos rebanhos, totalizando 4334 oócitos recuperados. Os oócitos foram classificados, e as estruturas viáveis (GI, GII e GIII) foram utilizadas para produção in vitro de embriões (PIVE). Foi observada uma média de oócitos recuperados para as doadoras F1 de 18,14±1,33. Além disso, notou-se que não houve diferença entre os dois cruzamentos utilizados, considerando média de total de embriões (4,96±0,40 e 6,56±0,76) para o cruzamento F1 X HPB (Holandês preto e branco) e F1 X Gir, respectivamente. Portanto, as doadoras F1 apresentaram potencial como doadoras de oócitos no sistema de produção in vitro de embriões, independentemente da raça do touro cujo sêmen foi utilizado.

The aim of this study was to investigate the effects of human follicle stimulating hormone (hFSH) on the in vitro culture of caprine preantral follicles. Fragments of goat ovarian cortex were cultured in α-MEM + supplemented with 0, 10, or 50 ng/mL hFSH for one or seven days. Small fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The statistical tests used in this study were Lilliefors, Cochran, and Tukey's (when significance was detected, PROC ANOVA, SAS was used). The results revealed a reduction in the percentage of normal follicles after one or seven days of culture under all treatment conditions. The rates of follicular survival were similar to each other, within each day of culture. The medium containing 10 ng/mL hFSH reduced the percentage of primordial follicles following culture for one and seven days and did not increase the percentage of developing follicles. The follicular diameter of ovarian tissue cultured in α-MEM + medium and medium supplemented with 10 ng/mL of hFSH did not change when compared with the control (non-cultured). The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in medium containing 10 ng/mL hFSH. In conclusion, hFSH (10 ng/mL) is capable of promoting the activation of primordial follicles and maintaining the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles cultured in vitro for seven days. Key words: Caprine, preantral follicles, hFSH, feasibility ResumoO objetivo desse estudo foi investigar os efeitos do FSH humano (hFSH) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos do córtex ovariano de caprinos foram cultivados em α-MEM + suplementado com 0, 10, ou 50 ng/mL de hFSH por um ou sete dias. Pequenos fragmentos de tecido ovariano cultivado e não cultivados, foram processados por histologia clássica e microscopia eletrônica Costa, S. L. da et al.de transmissão. Os testes estatísticos utilizados na pesquisa foram Lilliefors, Cochran, e Tukey's (caso significância -PROC ANOVA; SAS). Os resultados mostraram uma redução no percentual de folículos normais, após um ou sete dias de cultivo em todas as condições de tratamento. As taxas de sobrevivência folicular foram semelhantes entre si, dentro de cada dia de cultivo. O meio contendo 10 ng/mL de hFSH reduziu a percentagem de folículos primordiais no dia um e sete de cultivo, e não aumentou a percentagem dos folículos em desenvolvimento. O diâmetro folicular de tecido ovariano cultivado em meio α-MEM + e meio suplementado com 10 ng/mL de hFSH não alterou, quando comparado com o controle (não cultivado). As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio contendo 10 ng/mL de hFSH. Em conclusão, o hFSH (10 ng/mL) é capaz de promover a ativação de folículos primordiais e manter a integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro por até sete dias. Palavras-chave: Caprino, folículos pré-antrais, hFSH, viabilidade

AbstratThe aim of this study was to investigate the influence of the interaction between follicle stimulating hormone obtained from Human Pituitary (hFSH; 10 ng/mL), Insulin-like Growth Factor Type 1 (IGF-I; 100 ng/mL) and thyroxine (T 4 ; 10, 20 ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles (PAF) cultured in vitro. Fragments of ovarian cortex collected from 17 nonpregnant adult goats underwent different treatments that included α-MEM + medium, IGF-I, hFSH, T 4 and were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the percentage of normal follicles, after one and seven days of culture in media α-MEM + (cultured control), T 4 (10)/IGF-I, T 4 (20)/IGF-I/hFSH and in media α-MEM + , IGF-I/hFSH, T 4 (20)/IGF-I/hFSH, T 4 (20)/IGF-I/hFSH , when compared to the non-cultured control. However, the medium containing T 4 (20)/hFSH showed a follicular survival rate higher than the other treatments, when cultured for seven days. It was also observed that the follicular diameter did not change when cultured in this medium, when compared to the control (non-cultured). The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured in a medium containing T 4 (20)/hFSH. In conclusion, the medium containing T 4 (20)/hFSH showed the best results, when evaluating the survival, growth and ultrastructural aspects of caprine preantral follicles cultured in vitro.Keywords: Caprine, hormone, in vitro culture, preantral follicles, ultrastructural analysis. ResumoO objetivo deste estudo foi investigar a influência da interação entre o Hormônio Folículo Estimulante obtido da pituitária Humana (hFSH; 10 ng/mL), Fator de Crescimento Semelhante a Insulina Tipo 1 (IGF-I; 100 ng/mL) e Tiroxina (T 4 ; 10, 20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro. Fragmentos do córtex ovariano coletados a partir de 17 cabras adultas não gestantes foram submetidos a diferentes tratamentos que incluíam meio α-MEM +, IGF-I, hFSH, T 4 e em seguida foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados demonstraram uma redução no percentual de folículos normais, após um e sete dias de cultivo nos meios α-MEM + (controle cultivado), T 4 (10)/IGF-I, T 4 (20)/IGF-I/hFSH e nos meios α-MEM + , IGF-I/hFSH, T 4 (20)/IGF-I/hFSH, T 4 (20)/IGF-I/hFSH , quando comparados ao controle não cultivado. Entretanto, o meio contendo T 4 (20)/hFSH apresentou taxa de sobrevivência folicular superior aos demais tratamentos, quando cultivado por sete dias. Observou-se, ainda, que o diâmetro folicular quando cultivado neste meio não se alterou, quando comparado ao controle (não cultivado). As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados em meio contendo T 4 (20)/hFSH. Em conclusão, o meio com T 4 (20)/hFSH apresentou os melhores resultados, quando se avaliou sobrevivência, crescimento e aspectos ultraestruturais de folículos pré-antrais de caprinos cultivados in vitro.Palavras-c...

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In this study, the polymerase chain reaction (PCR) was used to evaluate the presence of viral DNA in ovarian tissue, in the cumulus-oocyte complex (COC), follicular liquid, and blood of animals naturally infected with bovine herpesvirus-1 (BoHV-1). The serum profile of the sampled animals was also evaluated. Samples of serum, blood, ovarian tissue, follicular liquid, and COC were collected from 147 slaughterhouse animals that were not vaccinated against BoHV-1. Contaminated or insufficient samples were disregarded. Serological tests allowed the identification of serum-positive animals with neutralizing antibodies against BoHV-1. Analysis of samples by PCR revealed the presence of viral DNA in 0.9% (1/115) of the COC samples, in 4.3% (5/117) of the ovarian tissue samples, and in 2.8% (3/108) of the blood samples. Viral DNA was not detected in any of the follicular liquid samples. In serological samples, a positivity of 83.6% (117/140) was observed for BoHV-1. All PCR-positive animals, regardless of the samples analyzed, showed positivity in the serum neutralization test for the detection of BoHV-1-specific antibodies. According to these results, a high prevalence of antibodies against BoHV-1 was detected in naturally infected animals from different herds, and the molecular tests revealed the presence of viral DNA in bovine ovarian tissue, providing evidence that this might be a site of BoHV-1 infection in naturally infected animals. Key words: Bovine herpesvirus, infectious bovine rhinotracheitis, cumulus-oocyte complex, ovarian tissue ResumoNeste trabalho foi avaliada a presença do DNA viral, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), no tecido ovariano, nos oócitos, líquido folicular e sangue de vacas naturalmente infectadas. Também foi avaliado o perfil sorológico dos animais amostrados. Foram coletadas amostras de soro, sangue, tecido ovariano, líquido folicular e complexo cumulus-oócitos de 147 animais abatidos em frigorífico não vacinados contra o herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Amostras tóxicas ou insuficientes foram descartadas. Os testes sorológicos foram realizados permitindo a identificação dos animais soropositivos para anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1. Foram realizadas as PCRs onde foi observada a presença do DNA viral em 0,9% (1/115) dos oócitos, em 4,3% (5/117) do tecido ovariano e em 2,8% (3/108) do sangue. Em nenhuma das amostras de líquido folicular foi detectado o DNA viral. Nas amostras sorológicas observou-se 83,6% (117/140) de positividade para o BoHV-1. Dentre 1 Discente, Universidade Federal de Viçosa, UFV, Viçosa, MG, Brasil. E-mail: emiliovet2004@yahoo.com.br 2 Profs., UFV, Viçosa, MG, Brasil. E-mail: epcosta@ufv.br; asjvet@hotmail.com 3 Discentes, UFV, Viçosa, MG, Brasil. E-mail: vramendes@hotmail.com; sanelylc@hotmail.com; marcusrsantos@yahoo.com os animais positivos na PCR, independente das amostras, todos apresentavam positividade no teste de soroneutralização para detecção de anticorpos para BoHV-1. Conclui-se que em animais de diferentes rebanhos analisados f...