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The aim of the present study was to evaluate a species-specific nested PCR based on a previously described species-specific PCR for detection of B. ovis in semen and urine samples of experimentally infected rams. The performance of the species-specific nested PCR was compared with the results of a genus-specific PCR. Fourteen rams were experimentally infected with the Brucella ovis REO 198 strain and samples of semen and urine were collected every week up to 180 days post infection. Out of 83 semen samples collected, 42 (50.6%) were positive for the species-specific nested PCR, and 23 (27.7%) were positive for the genus-specific PCR. Out of 75 urine samples, 49 (65.3%) were positive for the species-specific nested PCR, whereas 11 (14.6%) were genus-specific PCR positive. Species-specific nested PCR was significantly more sensitive (P<0.001) than the genus-specific PCR in semen and urine from experimentally infected rams. In conclusion, the species-specific nested PCR developed in this study may be used as a diagnostic tool for the detection of B. ovis in semen and urine samples from suspected rams.Keywords: Brucella ovis, species-specific, nested PCR, semen, urine de sêmen, 42 (50,6%) foram positivas pela nested e 23 (27,7%) foram positivas pela 49 (65,3%) foram positivas pela nested enquanto 11 (14,6%) PCR, sêmen, urina RESUMO O presente estudo objetivou avaliar uma técnica de nested PCR espécie-específica delineada a partir de PCR espécie-específica descrita anteriormente para detecção de B. ovis em sêmen e urina de carneiros infectados experimentalmente. O desempenho da nested PCR espécie-específica foi comparado com os resultados de uma PCR gênero-específica. Quatorze carneiros foram infectados experimentalmente com Brucella ovis REO 198 e amostras de sêmen e de urina foram colhidas semanalmente até 180 dias após a infecção. De 83 amostras

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Analisaram-se 464 amostras individuais de leite e 54 amostras de leite de latões, oriundos de leite dos mesmos animais, por meio do teste do anel do leite (TAL) visando à sua aplicação no diagnóstico individual e de rebanhos da brucelose bovina. Foram também avaliadas 464 amostras de soro sangüíneo por meio de provas do antígeno tamponado acidificado (ATA), soroaglutinação lenta em tubos (SAL) e 2-mercaptoetanol (2-ME), todas para brucelose. Cento e vinte e três amostras (26,5%) testadas pelo TAL apresentaram resultados positivos. Dessas, 30 resultaram positivas ao ATA, 28 ao ATA, à SAL e ao 2-ME e 18 à SAL. Das amostras positivas ao TAL, 95 pertenciam a animais sorologicamente negativos ao 2-ME, caracterizando 77,2% (95/123) das reações falso-positivas; dos resultados negativos ao TAL, 4 pertenciam a animais sorologicamente positivos, caracterizando 1,2% (4/341) de reações falso-negativas no TAL individual. Das 54 amostras de leite de latões analisadas pelo TAL, 17 foram consideradas positivas, das quais uma foi caracterizada como falso-positivo, pois todos os animais que a compunham foram negativos ao 2-ME. De 37 latões considerados negativos ao TAL, três continham leite de animais positivos ao 2-ME, caracterizando 8,1% de falso-negativos. O TAL individual demonstrou elevado percentual de resultados falso-positivos, enquanto o TAL em amostras de leite obtidas em latões detectou 84,2% de latões contaminados e 75% de rebanhos infectados.

Communication [Comunicação] Adaptation and evaluation of polymerase chain reaction for Brucella ovis detection in semen, urine and organs of rams experimentally infected[Adaptação e avaliação da reação em cadeia da polimerase para detecção de Brucella ovis em sêmen, urina e órgãos de carneiros infectados experimentalmente]

B. ovis pathogenicity was evaluated in experimentally inoculated and naturally infected rams. Ten animals were submitted to simultaneous conjunctival and intrapreputial inoculation with 2x10 9 CFU/ mL of B. ovis REO 198. After that, animals underwent physical examination and blood samples were collected for serology every week. Positive serology results started to be observed in the 3 rd week, with fluctuations in titers. Clinical changes began in the 5 th week after inoculation and were associated with positive serology in the acute phase of the disease. Presence of B. ovis in semen and urine culture was intermittent. Three non-inoculated animals showed natural infection. B. ovis was shed twice in semen of one serology-negative animal. The study underscored the pathogenic characteristics of B. ovis REO 198 in Santa Inês rams, as well as the importance of animals as potential sources of infection. Key words: B. ovis, brucellosis, ovine, clinical signs, experimental inoculation ResumoPatogenicidade da B. ovis foi avaliada em carneiros inoculados experimentalmente e naturalmente infectados. Dez animais foram submetidos à inoculação conjuntival e intrapreputial simultânea com 2x10 9 UFC/mL de B. ovis REO 198. Depois disso, os animais foram submetidos ao exame físico e amostras de sangue foram coletadas para sorologia a cada semana. Sorologia positiva começou a ser observada na terceira semana, com flutuações nas titulações. As alterações clínicas começaram na quinta semana após a inoculação e foram associadas com sorologia positiva na fase aguda da doença. A presença de B. ovis em sêmen e cultura de urina foi intermitente. Três animais não inoculados apresentaram infecção natural. B. ovis foi eliminada duas vezes em sêmen de animal com sorologia negativa. O estudo destacou as características patogênicas de B. ovis REO 198 em carneiros Santa Inês, bem como a importância dos animais como potenciais fontes de infecção.