Currently, contamination of indoor environment by fungi and molds is considered as a public health problem. The monitoring of indoor airborne fungal contamination is a common tool to help understanding the link between fungi in houses and respiratory problems. Classical analytical monitoring methods, based on cultivation and microscopic identification, depend on the growth of the fungi. Consequently, they are biased by difficulties to grow some species on certain culture media and under certain conditions or by noncultivable or dead fungi that can consequently not be identified. However, they could have an impact on human health as they might be allergenic. Since molecular methods do not require a culture step, they seem an excellent alternative for the monitoring of indoor fungal contaminations. As a case study, we developed a SYBR® green real-time PCR-based assay for the specific detection and identification of Aspergillus versicolor, which is frequently observed in indoor environment and known to be allergenic. The developed primers amplify a short region of the internal transcribed spacer 1 from the 18S ribosomal DNA complex. Subsequently, the performance of this quantitative polymerase chain reaction (qPCR) method was assessed using specific criteria, including an evaluation of the selectivity, PCR efficiency, dynamic range, and repeatability. The limit of detection was determined to be 1 or 2 copies of genomic DNA of A. versicolor. In order to demonstrate that this SYBR® green qPCR assay is a valuable alternative for monitoring indoor fungal contamination with A. versicolor, environmental samples collected in contaminated houses were analyzed and the results were compared to the ones obtained with the traditional methods.

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We carried out a cross-sectional study in 12 rural villages in order to identify the risk factors for Kashin-Beck disease in Tibet. Children aged 5-15 years (n=575) were examined and their corresponding houses were visited. Samples were collected in order to study fungal contamination of stored grain and the organic matter content of drinking water. Multivariate analysis was performed using logistic regression and population attributable fractions were computed to estimate the impact of each factor. The following variables were independently associated with the disease: age, gender, low socio-economic status, indicators of a poorly diversified diet, iodine deficiency and small water container size (with higher organic matter levels in small containers). Selenium deficiency was severe in all study subjects. The degree of fungal contamination of barley grain was related to the highest percentage of cases (65%) in a sample of the study population. Higher urinary iodine levels were not associated with decreasing prevalence rates when Alternaria sp. was isolated. The data that we report supports the hypothesis that Kashin-Beck disease occurs as a consequence of oxidative damage to cartilage and bone cells when associated with decreased antioxidant defence. Another mechanism that may coexist is bone remodelling stimulated by thyroid hormones whose actions can be blocked by certain mycotoxins.Résumé Nous avons réalisé une enquête transversale dans 12 villages ruraux afin d'identifier les facteurs de risque de la maladie de Kashin-Beck au Tibet. Les enfants âgés de 5 à 15 ans (n=575) et leurs maisons ont été examinés. La contamination fongique des céréales et le contenu en matières organiques de l'eau de boisson ont été étudiés dans des échantillons de la même population. L'analyse multivariée a été effectuée par régression logistique et les fractions attribuables ont été calculées afin d'estimer l'impact de chaque facteur. Les variables suivantes étaient indépendamment associées à la maladie: l'âge, le sexe, un bas état socio-économique, une alimentation peu diversifiée, la déficience en iode et une petite taille du réservoir à eau (présentant un contenu en matiè-res organiques plus élevé). La déficience en sélénium était sévère chez tous les enfants de l'étude. Le degré de contamination fongique des grains d'orge expliquait le plus haut pourcentage de cas (65%) dans le sous-modèle mycologique. L'iode urinaire n'était pas associé à la maladie lorsque Alternaria sp. était isolé. Les résultats sont compatibles avec des dommages oxydatifs aux cellules osseuses en présence d'une défense antioxidante défi-ciente. Un autre mécanisme co-existant possible est le remodelage osseux de l'os stimulé par les hormones thyroidiennes qui peut être bloqué par certaines mycotoxines.

In order to clarify the association between mycotoxin-producing fungi in food and Kashin-Beck disease (KBD), we examined the occurrence and contamination levels of fungi in samples of barley grain, from KBD-affected families and from unaffected families in endemic areas. A control area without the occurrence of KBD served as reference. The first results obtained in 1995 showed that total mesophilic fungal contamination of barley grain was consistently higher in families with KBD. Trichothecium roseum (Pers) Link ex gray, Dreschlera Ito and Alternaria Nees ex Fr. were the three most common fungi significantly associated with KBD. In 1996 we again observed a significant difference between affected and non-affected families, especially with Trichothecium roseum and Ulocladium Preuss. On this basis, measures to prevent KBD were suggested and a preventive program has been set up since 1998 in 20 new villages.Résumé Afin de vérifier l'hypothèse d'une relation entre la contamination des aliments par des moisissures et leurs toxines, avec la maladie de Kashin-Beck, nous avons évalué l'occurrence et le taux de contamination fongique dans les grains d'orge. Les études ont été menées en zones endémiques, chez des familles affectées par la maladie et chez des familles non-affectées. Une vallée contrôle, non affectée, a servi de référence. Les premières données obtenues en 1995 montre que le taux de contamination totale des grains d'orge par les moisissures mésophiles est régulièrement plus élevé chez les familles avec KBD. Trichothecium roseum (Pers.) Link ex gray, Dreschlera Ito et Alternaria Nees ex Fr. sont les trois fongus dont la présence est significativement corrélée avec la maladie. En 1996, nous avons à nouveau obtenu une différence significative entre les familles affectées et non affectées, particulièrement pour Trichothecium roseum et Ulocladium Preuss. Sur cette base, des mesures pour éviter le KBD furent suggérées et un programme préventif a démarré en 1998 dans 20 nouveaux villages.

A radiological study of osteoarticular changes in Kashin-Beck Disease (KBD) was undertaken on the appendicular skeleton in 105 patients with KBD, in 31 healthy subjects living in an endemic area and in 30 healthy subjects living in a non-endemic area. The bone age was delayed in all three populations with no significant difference between the three studied Tibetan populations. Radiological changes occur in 56% of patients with KBD, and are usually bilateral. An analysis of the distribution of lesions shows a proximo-distal gradient. The changes are more common in the distal aspect of the limb and the lower limb is involved more commonly than the upper limb. The foot and ankle are involved in 89.5% of cases. The radiological changes and their distribution might be explained by the hypothesis of inhibition of angiogenesis by mycotoxins, exacerbated by chemical and physical environmental factors.Résumé Une étude radiographique des lésions ostéoarti-culaires produites par la maladie de Kashin-Beck (KBD) a été réalisée au Tibet sur le squelette appendiculaire de 105 patients atteints de KBD, de 31 sujets cliniquement sains vivant en région endémique et de 30 sujets en ré-gion non endémique. La détermination de l'âge osseux révèle un retard de la maturité osseuse dans les trois groupes. Les lésions radiologiques sont présentes dans 56% des cas cliniques de KBD et sont bilatérales dans presque tous les cas. Le nombre de lésions augmente vers la périphérie. Le membre inférieur est plus souvent atteint que le membre supérieur. Le pied et la cheville sont atteints dans 89.5% des cas présentant une lésion radiologique. Les lésions radiologiques observées et leur distribution pourraient être expliquées par une inhibition de l'angiogénèse aggravée par les facteurs environnementaux chimiques et physiques.

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Culturable microorganisms from various samples taken at an active factory performing wool and goat hair cleaning were isolated and analyzed. Bacillus anthracis was found in air filter dust, wastewater, and goat hairs, where it accounted for approximately 1% of the total counts of viable bacteria. Consistent with the countries of origin of the processed material (South Caucasian and Middle Eastern), all B. anthracis isolates belonged to the same phylogenetic cluster, as determined by variable-number tandem repeat (VNTR) typing at eight loci. Within this cluster, five closely related VNTR subtypes could be identified, of which two were previously unreported. Additional diversity was observed when more sensitive genetic markers were assayed, demonstrating the multifocal nature of goat hair contamination. Goat hair originating from areas where anthrax is endemic remains a material with high biological risk for modern woolworkers.

Mycotoxins are naturally occurring toxic chemical compounds produced by fungi infesting agricultural crops both during their growth and storage. Such secondary metabolites, when ingested, can produce toxic syndromes in humans. As it has been suggested that mycotoxins might be involved in the development of Kashin-Beck disease (KBD), we undertook a survey of barley grains of KBD-affected families and non-affected families in that country. We found, by thin layer chromatography, a hitherto unknown metabolite of Alternaria sp. This was especially common on the barley grains of KBD-affected families.Résumé Les mycotoxines sont des métabolites secondaires produits des champignons infestant les céréales au cours de la période culturale ou durant le stockage des grains. De telles substances chimiques peuvent être toxiques vis-à-vis de l'homme lorsqu'elle sont ingérées. La contamination des grains de céréales par des mycotoxines constitue toutefois une piste sérieuse pour la compré-hension de l'étiologie de la maladie de Kashin-Beck.Nous avons entrepris des analyses de plusieurs mycotoxines sur des échantillons de grains d'orge provenant de familles malades et de familles non malades au Tibet. Un métabolite, encore inconnu, produit par Alternaria spp. a été détecté dans les échantillons de grains provenant des familles malades.