Foi investigada a eficácia comparativa da pulverização foliar em tomateiro de acibenzolar-S-metil (ASM) e Ecolife® na proteção contra Xanthomonas vesicatoria, bem como avaliada a ativação de algumas respostas bioquímicas de defesa de planta. Plantas de tomateiro cv. Santa Cruz Kada foram pulverizadas com acibenzolar S-metil (0,2 g l-1 ASM) e uma formulação natural proveniente de biomassa cítrica denominada Ecolife® (5 ml l-1). Quatro dias após as pulverizações, as plantas foram inoculadas com um isolado patogênico de Xanthomonas vesicatoria. Em experimentos de quantificação de doença, a pulverização foliar de Ecolife® e ASM conferiu 39,2% e 47,7% de proteção, respectivamente. A resistência induzida em plantas pulverizadas com ASM e Ecolife® foi evidenciada pelo aumento da atividade de peroxidases (POX) e oxidases de polifenóis (PPO), iniciado logo às primeiras horas após as pulverizações, continuando até 12 dias de avaliação. A despeito da tendência de queda nas atividades de amônia-liases de fenilalanina (PAL) a partir de 3 dias após as pulverizações, plantas tratadas com ASM e Ecolife® tiveram discreto aumento no acúmulo de lignina, principalmente aquelas pulverizadas com Ecolife® e inoculadas com X. vesicatoria. Teores de fenóis solúveis totais decresceram significativamente, 9 e 12 dias após pulverizações. O aumento nas atividades de POX e PPO poderia resultar em lignificação, a qual estaria associada a uma estratégia de defesa do tomateiro contra a mancha bacteriana.
RESUMOAtu a lmente , existe a necessid a de de se desenvolv er métodos sen sí ve is, b a r a t os, r ep ro du z ív ei s e r á p id os pa ra a d e te cç ã o d e fitobactérias em sementes. O objetivo deste tra balho foi otimiza r um método de obtenção das células bacterianas e a técnica de PCR p a ra d e t ec ç ã o de C u rt o b a c t e r i u m f l a c c u m fa c i e n s p v. flaccumfaciens (Cff), em sementes de feijão. Foi utilizado o primer CffFOR2-REV4 , desenhado a partir do fra gmento amplificado via PC R b a se a do na se qü ê nci a r epet iti va (Re p-P CR) . Ava l ia r a m-se ta mbém qu a tro métodos de prepa ra çã o dos extra tos de sementes d e fe i jã o pa r a a o bt e n çã o cé l u la s de C ff : 1 ) e x tr a t o b r u t o d e se me n t e s; 2 ) e x t r a to c o nc e n t ra Essa s du a s técnica s, a lém de detecta r a ba ctéria , a presenta m a lta sensibilida de, detecta ndo a té 1 semente inocu la da artificialmente a rti ficia lm ente c om Cff em 9 9 9 seme ntes sa di a s. Ana lisa ra m -se dezessete lotes comercia is de sementes de feijã o pelo método de co nc en tra çã o de ex tra to p or ce nt rifu g a ç ã o, send o qu e e m do ze detectou-se a bactéria Cff, observado pela presença de bandas com 3 0 6 p b. Porta nto, foi possível otimiza r u m métod o de obt ençã o da s célula s bacterianas e técnica de PCR pa ra detecção de Cff em sem e n te s de fei j ã o, q u e sej a sen sí ve l , r e p ro d u zí v e l e de fá c i l execução, que poderá ser utilizado rotineira mente em labora tórios de a ná lises de sementes.Keywords: Detection of bacteria inoculation, water restriction.
ABSTRACTCu rrently, there is a need to develop sensitive methods, inexpensive, reproducible and rapid detection of phytobacteria seeds. The objective of this study was to optimize a method for obtaining ba cteria l cells a nd the PCR technique to detect Cu rto b a c te riu m flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff), in bean seeds using PCR. It was used one pairs of primers CffFOR2-REV4, designed from an PCR amplified fragment of the conserved repetitive sequence (Rep-PCR). The primer pair CffFOR2-REV4 was selected in this study, because demonstrated higher reproducibility and efficacy in the detection of Cff strains in bean seeds. Four methods were also evaluated in the seed extra ct prepa ra tion for PCR: 1 ) rou gh seed extra ct; 2) millipore membrane filter (0 .2 2Mu dia meter) concentrated seed extract and subsequently ressuspended in water; 3) centrifuge concentrated seed
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