Отрута змій роду Gloydius є багатим джерелом протеїнів, здатних інгібувати агрегацію тромбоцитів. Такі протеїни або їх рекомбінантні аналоги є універсаль-ним інструментом для вивчення процесів взаємодії білків і рецепторів у системі гемостазу. Разом з тим, уже вивчені та потенційно нові фармакологічні властивості інгібіторів агрегації тромбоцитів із отрути змій є підґрунтям для створення промис-лових технологій їх виробництва.У даній роботі представлена частина технологічної розробки паралельного отримання кількох цільових білків із отрути G. blomhoffii brevicaudus, а саме етапів виробництва інгібітора агрегації тромбоцитів. Цільовий білок було очищено із засто-суванням трьох різних хроматографічних підходів. Показано, що він є одноланцюго-вий протеїн з молекулярною масою 12001,55 Да, ізоелектричною точкою 8,03, який інгібував АДФ-індуковану агрегацію тромбоцитів кроля у плазмі, збагаченій тромбо-цитами, з ІД 50 =3,26×10-6 г або 542×10 -9 М і не виявляв ензиматичної активності.Ключові слова: отрута змій, G. blomhoffii brevicaudus, інгібітор агрегації тром-боцитів, хроматографія білків.Отрута змій є багатим джерелом біологічно активних компонентів, здатних інгібувати агрегацію тромбоцитів за різними механізмами [28]. Дезінтегрини, що містяться в отруті Viperidae і Crоtalidae, є специфічними інгібіторами агрегації тромбоцитів, які діють як антагоністи рецептора GP IIbIIIa [29,26]. На поверхні тромбоцитів фібриноген зв'язується з інтегрином IIbIIIa, викликаючи взаємодію тромбоцит-тромбоцит, що є заключною стадією агрегації тромбоцитів, індукова-ної АДФ, тромбіном, колагеном і арахідоновою кислотою. Дезінтегрини блокують IIbIIIa, заважаючи зв'язуванню фібриногену, і тим самим спричиняють інгібування агрегації тромбоцитів. Крім IIbIIIa, дезінтегрини можуть зв'язуватися і з іншими інтегринами групи β1 і β3, такими як рецептори вітронектину (αVβ3), фібронектину (α5β1), колагену (α2β1) і тромбіну (β1α). Таке зв'язування опосередковане Arg-GlyAsp (або RGD, за однобуквеним позначенням амінокислот) послідовністю у струк-турі дезінтегринів [19,36]
Фосфоліпази А 2 (ФЛА2) є найбільш розповсюдженими компонентами отрути змій. Здатність впливати на клітинні взаємодії, а саме агрегацію тромбоцитів, ріст ракових клітин, процеси ангіогенезу та диференціювання клітин, робить цей фер-мент потенційним терапевтичним і канцеростатичним агентом у боротьбі зі зло якісними пухлинами. Зазначені потенційні лікувальні функції ФЛА2 потребують за-безпечення високоочищеним ферментом.Нами розроблено й апробовано спосіб отримання фосфоліпази А 2 з отрути Gloydius blomhoffii brevicaudus, який включає чотири послідовні стадії хроматогра-фічного фракціонування. Очищена ФЛА2 є кислим білком із молекулярною масою 13762,86 Да та рІ 4,17. Розрахований рН оптимум дії ферменту становить 8,5. ФЛА2 здатна інгібувати АДФ індуковану агрегацію тромбоцитів і виявляє цитоток-сичний ефект. Здатність ФЛА2 індукувати диференціювання клітин лінії РС12, де-кларована деякими авторами, не виявлена.Ключові слова: отрута змій, Gloydius blomhoffii brevicaudus, фосфоліпаза А 2 , рідинна хроматографія. ВСТУПСекреторні фосфоліпази А 2 (ФЛА2), зокрема фосфоліпази А 2 отрути змій, є во до розчинними низькомолекулярними (11-19 кДа) ферментами з ізоелектричною точ-кою від 4,0 до 10,5 та високою молекулярною стабільністю, яка обумовлена вели-кою кількістю дисульфідних зв'язків у їхній структурі. Оптимальна каталітична ак-тивність ферментів спостерігається при рН 7,5-9,0 за наявності обов'язкового ко-фактора Ca 2+ . Фармакологічні й токсичні властивості фосфоліпаз А 2 пов'язані з їх-ньою біохімічною активністю. ФЛА2 гідролізують ефірний зв'язок гліцерофосфолі-підів у положенні sn2 з утворенням лізофосфоліпідів і вільних ненасичених жирних кислот, арахідонової, пантатенової та інших [31]. Вивільнені жирні кислоти вико-ристовуються для утворення фізіологічно активних сполук (простагландинів, лей-котрієнів, тромбоксанів [9]) і разом з утвореним лізофосфоліпідом, який має лише
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
hi@scite.ai
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.