Purification and characterization of platelet aggregation inhibitor from the Gloydius blomhoffii brevicaudus venom

Abstract

Отрута змій роду Gloydius є багатим джерелом протеїнів, здатних інгібувати агрегацію тромбоцитів. Такі протеїни або їх рекомбінантні аналоги є універсаль-ним інструментом для вивчення процесів взаємодії білків і рецепторів у системі гемостазу. Разом з тим, уже вивчені та потенційно нові фармакологічні властивості інгібіторів агрегації тромбоцитів із отрути змій є підґрунтям для створення промис-лових технологій їх виробництва.У даній роботі представлена частина технологічної розробки паралельного отримання кількох цільових білків із отрути G. blomhoffii brevicaudus, а саме етапів виробництва інгібітора агрегації тромбоцитів. Цільовий білок було очищено із засто-суванням трьох різних хроматографічних підходів. Показано, що він є одноланцюго-вий протеїн з молекулярною масою 12001,55 Да, ізоелектричною точкою 8,03, який інгібував АДФ-індуковану агрегацію тромбоцитів кроля у плазмі, збагаченій тромбо-цитами, з ІД 50 =3,26×10-6 г або 542×10 -9 М і не виявляв ензиматичної активності.Ключові слова: отрута змій, G. blomhoffii brevicaudus, інгібітор агрегації тром-боцитів, хроматографія білків.Отрута змій є багатим джерелом біологічно активних компонентів, здатних інгібувати агрегацію тромбоцитів за різними механізмами [28]. Дезінтегрини, що містяться в отруті Viperidae і Crоtalidae, є специфічними інгібіторами агрегації тромбоцитів, які діють як антагоністи рецептора GP IIbIIIa [29,26]. На поверхні тромбоцитів фібриноген зв'язується з інтегрином IIbIIIa, викликаючи взаємодію тромбоцит-тромбоцит, що є заключною стадією агрегації тромбоцитів, індукова-ної АДФ, тромбіном, колагеном і арахідоновою кислотою. Дезінтегрини блокують IIbIIIa, заважаючи зв'язуванню фібриногену, і тим самим спричиняють інгібування агрегації тромбоцитів. Крім IIbIIIa, дезінтегрини можуть зв'язуватися і з іншими інтегринами групи β1 і β3, такими як рецептори вітронектину (αVβ3), фібронектину (α5β1), колагену (α2β1) і тромбіну (β1α). Таке зв'язування опосередковане Arg-GlyAsp (або RGD, за однобуквеним позначенням амінокислот) послідовністю у струк-турі дезінтегринів [19,36]