Transplantation of allogeneic hepatocytes without immunosuppression: Long-term survival

Balladur, Pierre; Crema, Eduardo; Honiger, J; Calmus, Yvon; Baudrimont, M; Delelo, R; Capeau, Jacqueline; Nordlinger, Bernard

doi:10.1016/s0039-6060(05)80084-4

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“…While other ectopic sites for hepatocyte engraftment have been examined, they have usually been associated with insufficient engraftment and short-term graft survival [8][9][10][11][12][13][14][15][16]. It is possible that engraftment at such sites may also be affected by the process of hepatocyte isolation.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Intramuscular transplantation of engineered hepatic tissue constructs corrects acute and chronic liver failure in mice

Navarro-Alvarez

Soto-Gutiérrez

Chen

et al. 2010

Journal of Hepatology

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Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Intramuscular transplantation of engineered hepatic tissue constructs corrects acute and chronic liver failure in mice

Navarro-Alvarez

Soto-Gutiérrez

Chen

et al. 2010

Journal of Hepatology

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“…There are still no standardized liver dissociation techniques; however, all techniques propose the perfusion of solutions through the portal vein 5 in intact livers or small liver fragments 11,12 , with the methods differing in terms of the solution used for perfusion witch EDTA 7 , hyaluronidase, collagenase or a combination of these solutions 13 . In the present study, cell viability was 85% and 83% after dissociation with EDTA and collagenase, respectively, rates higher than those reported by other investigators 14 .…”

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

“…The perfusion solution had the following composition 7 : 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.8 mM MgSO 4, 1.6 mM Na 2 HPO 4, 0.4 mM KH 2 PO 4, 2 mM EDTA, and 25 mM NaHCO 3 . The EDTA solution was perfused through small catheters placed in the venous segments and fixed with 4.0 Prolene sutures at a constant temperature of 37ºC.…”

Section: Dissociation Of Human Liver Fragments By the Edta Methodsmentioning

confidence: 99%

Comparative analysis of preparation of human hepatocytes by the ethylenediamine tetraacetic acid and collagenase technique

et al. 2007

Self Cite

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Purpose:To compare the viability of human hepatocytes dissociated by the ethylenediaminetetraacetic acid and collagenase techniques. Methods: Hepatocytes were prepared by dissociation of liver fragments obtained from hepatectomies performed for therapeutic purposes at the Service of Digestive Tract Surgery, Federal University of Triângulo Mineiro. Results: During the first 4 days of the experiment, 70% of the cells presented birefringent membranes and were not stained with 2% erythrosine, and were therefore considered to be viable. During the first 3 days, hepatocyte viability was on average 71% in the EDTA group and 76% in the collagenase group, with no significant difference between groups. No significant difference was observed between groups at any time. The secretion of albumin by the cultured hepatocytes was preserved up to the seventh day. Mean albumin secretion during the first 3 days was 50 µg/ml in the two groups and a reduction of albumin production was observed from the fourth to the seventh day. Again, no significant difference was observed between groups at any time. Conclusion: Cell viability and preservation of albumin secretion by hepatocytes are similar for the EDTA and collagenase techniques. Key words: Cell Separation. Cell Transplantation. Edetic Acid. RESUMO Objetivo:Comparar a viabilidade dos hepatócitos humanos dissociados pelas técnicas do ácido etilenodiaminotetracético e da colagenase. Métodos: Hepatócitos foram preparados pela dissociação de fragmentos de fígado, provenientes de hepatectomias realizadas com o objetivo terapêutico no Serviço de Cirurgia do Aparelho Digestivo da Universidade Federal do Triângulo Mineiro. Resultados: Detectou-se que nos quatro primeiros dias de experimento 70% das células estavam com suas membranas biorrefringentes e não se coravam pela eritrosina a 2% portanto foram consideradas viáveis. Observou-se que nos três primeiros dias a viabilidade dos hepatócitos foi em média 71% no grupo EDTA e 76% na colagenase, diferença esta sem significado estatístico entre os grupos. Em nenhum momento, detectou-se diferença estatística entre os grupos. Com relação a preservação da secreção de albumina pelos hepatócitos em cultura observouse que foi mantida até o sétimo dia. Da mesma forma, notou-se que nos três primeiros dias a média de secreção de albumina de ambos os grupos foi de 50 ìg/dl e que após o quarto dia verificou-se redução da produção até o sétimo dia. Também não foi observado diferença significativa em nenhum momento entre os grupos. Conclusão: A viabilidade celular e a preservação da função de secretar albumina pelos hepatócitos são semelhantes pelas técnica do EDTA e da colagenase. Descritores: Separação Celular. Transplante de Células. Ácido Edético. -ORIGINAL ARTICLE

show abstract

“…Entretanto, neste mesmo estudo, hepatócitos humanos também foram transplantados em ratos Gunn imunocompetentes, sem imunossupressão, e nestes, a correção da deficiência enzimática durou menos que cinco dias 19 . Quando foi anteriormente utilizada a mesma técnica para transplante de hepatócitos alogênicos ou xenogênicos, de origem murina sem imunossupressão em ratos, a sobrevivência dos hepatócitos transplantados e a produção de albumina foram observadas até o 90° dia 20 . A correção de deficiências enzimáticas e aumento da sobrevida de ratos em vigência de insuficiência hepática aguda foram assim obtidas 21 .…”

Section: Discussionunclassified

Viabilidade do fígado bioartificial utilizando hepatócitos humanos imunoprotegidos por macroencapsulação

Nicoluzzi¹,

Repka

Rocha

et al. 2004

Rev. Col. Bras. Cir.

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RESUMO: Objetivo: O transplante de hepatócitos xenogênicos encapsulados pode ser utilizado no futuro em situações como a insuficiência hepática fulminante. Porém, observa-se perda precoce da expressão de genes hepatocitários específicos em hepatócitos humanos. O objetivo deste estudo é avaliar a influência da resposta imunológica na perda da expressão genética hepatocitária de hepatócitos humanos encapsulados e transplantados em ratos. Método: Hepatócitos humanos foram isolados de fragmentos hepáticos, encapsulados em fibras e transplantados em ratos. Nos dias 3, 7 e 14 após o transplante as fibras foram coletadas e avaliadas a morfologia por microscopia óptica e eletrônica, e a expressão dos genes por biologia molecular. O ARNm da albumina humana foi quantificado por RT-PCR e Northern blot. A resposta imunológica contra os hepatócitos foi avaliada através do ADN hepatocitário na busca de apoptose do núcleo celular e pelo aumento da expressão do CMH de classe I. Resultados: Os aspectos morfológicos dos hepatócitos mantiveram-se normais até o sétimo dia após o transplante. Não se observaram células envolvidas com resposta imunológica do receptor nas fibras. Os transcritos da albumina foram detectados até D-14. Entre os dias 3 e 7 estavam em 30% em relação ao dia 0. A análise do ADN mostrou bandas preservadas sem a presença de fenômenos de apoptose nos diferentes dias. Não ocorreu aumento da expressão do CMH de classe I. Conclusões: Hepatócitos humanos encapsulados e transplantados em ratos permanecem viáveis apesar da diminuição da expressão de determinados genes. Este fenômeno, não se deve à resposta imunológica do receptor, mas ao próprio processo de isolamento celular (Rev. Col. Bras. Cir. 2004; 31(5) INTRODUÇÃOO transplante hepático ortotópico constitui atualmente tratamento de escolha para doença hepática grave ou terminal. Esta intervenção comporta grande risco operatório, o paciente é submetido a tratamento imunossupressor por toda a vida e o custo desta terapia é elevado. Ressalta-se também que, no nosso meio, a doação de órgãos não condiz com a demanda, acarretando aumento na fila de espera, com conseqüentes agravos do estado clínico destes pacientes e piores resultados dos transplantes, razões pelas quais, certas equipes começaram a recorrer a alternativas tais como o doador vivo ou o split liver.O transplante de hepatócitos isolados como recurso para suprir insuficiência hepática poderia ser, em certos casos, alternativa ao transplante com fígado inteiro. Principalmente em casos de hepatite fulminante, a assistência hepática através da reposição de hepatócitos isolados, poderia dar tempo à regeneração hepática ou mesmo, de se obter um ór-gão isogrupo de qualidade, funcionando neste caso, como "ponte" até a obtenção de um órgão adequado 1 . Existem basicamente dois sistemas de assistência hepática: o fígado bioartificial externo ou bioreator e o fíga-do bioartificial implantável. O princípio de funcionamento do bioreator assemelha-se a hemofiltração através de membrana biocompatível contendo hepatócito...

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Transplantation of allogeneic hepatocytes without immunosuppression: Long-term survival

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Intramuscular transplantation of engineered hepatic tissue constructs corrects acute and chronic liver failure in mice

Intramuscular transplantation of engineered hepatic tissue constructs corrects acute and chronic liver failure in mice

Comparative analysis of preparation of human hepatocytes by the ethylenediamine tetraacetic acid and collagenase technique

Viabilidade do fígado bioartificial utilizando hepatócitos humanos imunoprotegidos por macroencapsulação

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