The investigation of SerRS distribution in tissues of higher eukaryotes with immunochemical methods

Abstract

Исследовано распределение серил-тРНК синтетазы (CepPC) в органах и тканях различных представителей позвоночных с использованием иммунохимических методов исследования. Показано, что наибольшее относительное содержание данного фермента отмечено в печени всех исследуемых представителей позвоночных (от рыб до человека). Обнаружено наличие высокомолекулярных весьма устойчивых комплексов CepPC с другими белками, сохраняющихся в лизатах эукариотических тканей даже в денатурирующих условиях. Введение. Различные органы и ткани высших эукариот отличаются степенью метаболизма и соответственно уровнями активности аминоацил-тРНК синтетаз, что может быть связано как с интенсивностью белкового синтеза, так и с-аминокислотным составом синтезируемых белков. Одна из аминоацил-тРНК синтетаз высших эукариот-серил-тРНК синтетаза (CepPC) печени быка (КФ 6.1.1.4)-исследована нами ранее [1]. Установлено, что CepPC-фермент типа а 2 с молекулярной массой (м. м.) около 120 000. Получены моноспецифические поликлональные антитела к CepPC печени быка методом аффинной хроматографии и исследованы некоторые иммунохимические свойства данного белка [2]. Иммунохимический подход позволяет получить не только качественно новую информацию о некоторых структурно-функциональных свойствах белков, но и прямо определить относительное содержание исследуемого белка, которое не во всех случаях совпадает с уровнем ферментативной активности. Известно также, что аминоацил-тРНК синтетазы функционируют в составе высокомолекулярных мультиферментных комплексов (так называемых кодосом), и компартментализация метаболических процессов в клетке играет важную роль в функционировании белоксинтезирующего аппарата [3]. Изучение распределения CepPC в органах и тканях высших эукариот также важно и с точки зрения поиска наиболее богатого данным ферментом органа, так как выделение и очистка синтетаз эукариот до гомогенного состояния-весьма трудоемкий процесс, и нахождение «суперпродуцента» облегчило бы эту задачу. Материалы и методы. Материалами исследования служили: печень, почки, мозг и сердце мыши; печень, почки, мозг, поджелудочная железа кролика; печень, гипофиз и поджелудочная железа быка; печень рыбы, печень курицы; печень и сердце человека. Органы заморожены при-70 °С. CepPC печени быка выделяли по описанному методу [1]. Поликлональные антитела к CepPC печени быка получали по модифицированному методу Бейли, как описано ранее [2]. Синтез аффин