ABSTRACT. One hundred forty-four microorganisms previously isolated from coffee fruit (Coffea arabica) were grown on casein agar to evaluate their proteolytic activities. Fifty percent of filamentous fungi, 52.5% of bacteria and 2.6% of yeasts were able to secrete proteases. RESUMO. Atividade proteolítica de bactérias, leveduras e fungos filamentosos presentes em grãos de café (Coffea arabica L.). Este trabalho teve por objetivos avaliar a capacidade de secreção de proteases extracelulares por 144 microrganismos, previamente isolados de grãos de café (Coffea arabica) durante fermentação por via seca, e determinar a atividade das enzimas produzidas. Os microrganismos foram cultivados em ágar-caseína para avaliação da produção de enzimas proteolíticas. Dos 40 isolados de bactéria presentes na amostra, 52,5% apresentaram resultado positivo para o teste. Considerando os 66 isolados de fungos filamentosos, 50% foram capazes de secretar proteases, enquanto que dos 38 isolados de leveduras, apenas 2,6% conseguiram promover a hidrólise da caseína do meio. Os isolados que apresentaram capacidade de secreção de proteases foram, posteriormente, cultivados em meio líquido para a determinação da atividade enzimática em diferentes valores de pH (5,0, 7,0 e 9,0) a 30 o C. Os isolados Aspergillus ochraceus (48,7 U), Fusarium moniliforme 221 (37,5 U) e F. solani 359 (37,4 U) apresentaram os melhores resultados de atividade enzimática, o que foi verificado em pH 9,0. Também neste pH os isolados Bacillus subtilis 333 (27,1 U), Tatumella ptyseos (27,0 U) e B. megaterium 817 (26,2 U) apresentaram maior valor de atividade. A levedura Citeromyces matritensis apresentou atividade em pH 5,0 (2.40 U).Palavras-chave: enzimas microbianas, protease, fermentação de café.