Nucleotide sequence and transcriptional analysis of molecular clones of CAEV which generate infectious virus

Saltarelli, Mary; Quérat, Gilles; Konings, Danielle; Vigne, Robert; Clements, Janice E.

doi:10.1016/0042-6822(90)90303-9

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“…GenBank accession numbers: M14149 (Hess et al, 1986), L06906 (Braun et al, 1987), NC 001511 , NC 001463 (Saltarelli et al, 1990), S51392 (Sargan et al, 1993), S55323 (Andresson et al, 1993), X64109 (Kalinsky et al, 1994), AF322109 (Gjerset et al, 2000), AF425672 (Extramiana et al, 2001), AF479638 (Barros and Fevereiro, 2002) and AY101611 (Hotzel and Cheevers, 2002).…”

Section: Oligonucleotides For Pcr-primingmentioning

confidence: 99%

Specific detection of small ruminant lentiviral nucleic acid sequences located in the proviral long terminal repeat and leader-gag regions using real-time polymerase chain reaction

Brinkhof

Maanen

Wigger

et al. 2008

Journal of Virological Methods

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Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) detection of proviral nucleic acid sequences of small ruminant lentiviruses (SRLV) in blood samples was developed and evaluated.Priming oligonucleotides were designed on the highly conserved 5 untranslated leader-gag region while those on the long terminal repeat (LTR) assay were derived from literature. DNA was extracted from the buffycoat interlayer of centrifuged blood samples. Real-time PCR was performed by means of LightCycler technology (Roche Applied Science) using melting temperature analysis (SYBR Green I) for detection. Results were compared with those of serology using samples from Dutch sheep and goat flocks with known SRLV statuses, with sequential samples from a natural transmission experiment and samples from different regions in Norway, France, Spain and Italy.Real-time PCR testing, especially the application of oligonucleotides for priming the leader-gag region appeared promising in detecting SRLV specific proviral DNA in blood samples from both sheep and goats.

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Section: Oligonucleotides For Pcr-primingmentioning

confidence: 99%

Specific detection of small ruminant lentiviral nucleic acid sequences located in the proviral long terminal repeat and leader-gag regions using real-time polymerase chain reaction

Brinkhof

Maanen

Wigger

et al. 2008

Journal of Virological Methods

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“…As seqüências com senso das amostras BR-UFMG/PL1, BR-UFMG/PL2 e BR-UFMG/PL3 foram alinhadas separadamente com o padrão CAEV-Co (Saltarelli et al, 1990), para a retirada das regiões correspondentes aos iniciadores. Verificou-se que cada amostra resultou em uma seqüência de 593 nucleotídeos, correspondente à porção codificante para a proteína do capsídeo viral (CA ou p25), entre os aminoácidos 150 e 347 do padrão CAEV-Co, obtido no banco de dados Swissprot (número de acesso P33458).…”

Section: Resultsunclassified

“…Com relação às proteínas, foram observadas 20, 17 e 13 substituições nas amostras BR-UFMG/PL1, BR-UFMG/PL2 e BR-UFMG/PL3, respectivamente, quando cada um foi comparado com a amostra padrão CAEV-Co (Saltarelli et al, 1990). A maioria dessas substituições foram conservativas e mais freqüentes na porção Cterminal da proteína.…”

Section: As Seqüências De Nucleotídeos De Br-ufmg/pl1 Br-ufmg/pl2 E unclassified

Vírus da artrite encefalite caprina: isolamento e caracterização de parte do gene gag

Lima

Rocha

Stancek

et al. 2004

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

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RESUMOAmostras de sangue de 12 animais soropositivos pelo teste de imunodifusão em gel de agarose e que não apresentavam sinais clínicos sugestivos de infecção pelo vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) foram coletadas para isolamento viral. Mácrofagos derivados de monócitos foram co-cultivados com células de membrana sinovial caprina (MSC), resultando em cinco amostras que apresentaram efeito citopático característico do tipo persistente, semelhante ao observado para o CAEV. Uma técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) foi padronizada para amplificar parte do gene gag do genoma pró-viral, codificante para a proteína do capsídeo viral (p25). As cinco amostras foram amplificadas pela PCR e três delas, BR-UFMG/PL1, BR-UFMG/PL2 e BR-UFMG/PL3, foram seqüenciadas diretamente dos seus produtos de PCR. O alinhamento múltiplo das seqüências obtidas com outras de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR), obtidas no GenBank, e o dendrograma revelaram que as novas amostras de CAEV são únicas e distintas das demais amostras de LVPR, possuindo maior identidade de nucleotídeos e aminoácidos entre si e com as amostras de CAEV do que com a do vírus maedi-visna.Palavras-chave: vírus da artrite-encefalite caprina, isolamento, PCR, análise filogenética ABSTRACT Blood samples from 12 seropositive animals by agar gel immunodifusion test (AGID) showing no evident clinical signs of disease were taken to attempt caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) isolation. Monocyte-derived macrophages were co-cultured with goat synovial membrane cells (GSM) resulting in five virus isolations, which presented cytophatic effects of the persistent type, resembling those observed for CAEV. A polymerase chain reaction (PCR) assay was designed to amplify a portion of the gag proviral gene coding for the major core protein (p25). All of the five isolates were amplified by this PCR and three of them named BR-UFMG/PL1, BR-UFMG/PL2 and BR-UFMG

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“…Os resultados discordantes podem ser explicados pela diferença antigênica entre os dois vírus, apesar da menor divergência no gene gag, que codifica as nucleoproteínas (Pyper et al 1986, Saltarelli et al 1990, principais componentes dos Ag avaliados (Adams & Gorhan 1986). Por outro lado, Castro et al (dados não publicados) têm observado que soros negativos pelo teste de IDAG com Ag MVV deram reação positiva frente a esse teste utilizando Ag glicoproteico produzido com o CAEV, assim como quando testados por ELISA indireto com Ag CAEV.…”

Section: Resultsunclassified

“…These results suggested that only CAEV antigen should be used in immunodiffusion tests for CAEV diagnosis. (Pyper et al 1986, Saltarelli et al 1990), e que pode ocorrer resposta imunológica seletiva para glicoproteínas ou nucleoproteínas do CAEV, dependendo da fase de infecção (Johnson et al 1983, Rimstad et al 1994. Este trabalho foi elaborado com o objetivo de comparar antígenos nucleoproteicos do MVV e do CAEV para pesquisa de anticorpos para CAEV em soros caprinos.…”

Section: Introductionunclassified

Produção de antígeno nucleoprotéico do vírus da artrite-encefalite caprina e comparação com o do vírus Maedi-Visna para utilização em teste de imunodifusão em ágar gel

et al. 1998

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Foi feita uma comparação entre os antígenos (Ag), preparados a partir dos vírus Maedi-Visna (MVV) e Artrite-encefalite Caprina (CAEV) para detecção de anticorpos contra o CAEV em 120 amostras de soro caprino. A sensibilidade e especificidade relativa da imunodifusão em ágar gel (IDAG) usando-se Ag MVV em relação ao Ag CAEV, foi 77,3% e 100%, respectivamente (X2, p<0,01). Assim, para diagnóstico de infecção pelo CAEV recomenda-se apenas o uso de Ag preparado a partir do CAEV.

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Nucleotide sequence and transcriptional analysis of molecular clones of CAEV which generate infectious virus

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Specific detection of small ruminant lentiviral nucleic acid sequences located in the proviral long terminal repeat and leader-gag regions using real-time polymerase chain reaction

Specific detection of small ruminant lentiviral nucleic acid sequences located in the proviral long terminal repeat and leader-gag regions using real-time polymerase chain reaction

Vírus da artrite encefalite caprina: isolamento e caracterização de parte do gene gag

Produção de antígeno nucleoprotéico do vírus da artrite-encefalite caprina e comparação com o do vírus Maedi-Visna para utilização em teste de imunodifusão em ágar gel

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