Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais

Abstract

O interesse nas pesquisas com células-tronco derivadas de anexos fetais de diversas espécies cresceu exponencialmente nas últimas décadas em virtude de serem fontes de células-tronco adultas com potencial de diferenciação em diversas linhagens celulares que apresentam pouca ou nenhuma imunogenicidade, apresentando-se assim como alternativa de grande importância para a formação de bancos celulares. Apesar do crescente interesse, os estudos para espécie equina ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi isolar, caracterizar e diferenciar células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico equino obtidas do terço inicial, médio e final da gestação (LA-CTMs), comparando suas características. Foram colhidas 23 amostras de líquido amniótico as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro. Todas as amostras demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico as células de todos os grupos foram imunomarcadas para CD44, PCNA e vimentina com ausência de marcação para citoqueratina e Oct-4. Na citometria de fluxo observou-se a expressão de CD44 e CD90 e ausência de expressão de CD34, sendo que os marcadores CD44 e CD90 mostraram padrão de expressão decrescente em relação ao desenvolvimento gestacional. As amostras obtidas de todas as fases da gestação foram capazes de diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. Portanto, as células obtidas do líquido amniótico apresentaram características morfológicas, imunofenotípicas e potencial de diferenciação típicos das CTMs, demonstrando que a colheita pode ser realizada em qualquer fase gestacional. No entanto, mais pesquisas devem ser realizadas principalmente quanto à expressão de marcadores de pluripotencialidade (como o Oct-4) e ao seu potencial de diferenciação em linhagens extra mesodermais já relatados na literatura.

Culture of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue-derived stromal vascular fraction cells in different media

“…al 2012, De Vita et al 2013, and other animals reported in many studies, in which these cells were described as star-shaped or fibroblast-like.…”

“…De Vita et al (2013), studying mesenchymal stem cells from equine amniotic fluid, reported an initial difficulty in cell isolation, and achieved better cell adhesion on the culture plate by decreasing the amount of medium in the primary culture to leave the cells closest to the plate, and by increasing the time to the first exchange of medium from 2 to 7 days, to prevent the removal of cells that were capable of adhesion and were still in suspension. Vidal et al (2007) also observed that cell populations obtained from adipose tissue did not form as many colonies as cells from bone marrow, and that they were distributed more uniformly and adhered more firmly to the culture plate, as observed in this study.…”

“…Mesenchymal stem cell cultures with DMEM medium supplemented with fetal bovine serum (FBS) are often used today (De Vita et al 2013, Maia et. al 2012.…”

Equine mesenchymal stem cells from bone marrow, adipose tissue and umbilical cord: immunophenotypic characterization and differentiation potential

“…However, a study [50] with amniotic fluid demonstrated that the CD90 marker decreases as pregnancy develops. This inverse relationship may explain the findings in this present study because the samples collected in the slaughterhouse were from the final months of gestation (9 to 10 months).…”

<b>Estudo <i>in vitro</i> do potencial de diferenciação condrogênico e osteogênico de células mesenquimais obtidas de líquido e membrana sinovial de equinos</b>

“…As células obtidas também podem ser utilizadas na forma cultivada ou não cultivada, isto é, quando o tratamento é feito com a fração mononuclear e com a fração vascular estromal logo após a aspiração (MAIA et al, 2013).…”