Involvement of Bcl-2, Src, and ERα in gossypol-mediated growth inhibition and apoptosis in human uterine leiomyoma and myometrial cells

Abstract

Aim:To investigate the effect of gossypol on the growth of cultured human uterine leiomyoma and myometrial cells, the level of Bcl-2 and the activity of Src and estrogen receptor (ERα). Methods: Human uterine leiomyoma and adjacent normal myometrial cells were cultured in vitro. Both cell types were treated with a graded concentration of gossypol. Cell viability was assayed using CCK-8. Morphological change was observed with optical and electronic microscopy. Apoptosis was evaluated using TUNEL assay. Levels of Bcl-2, ERα and Src were analyzed using Western blotting. Results: Gossypol significantly inhibited growth and promoted apoptosis in cultured human uterine leiomyoma cells with the IC 50 value and its corresponding 95% confidence intervals (CI) of 6.5 (4.0-10.5), 9.0 (4.9-16.5), and 7.5 (4.0-14.1) μmol/L at 20, 40, and 60 h, respectively. Gossypol exerted inhibitory effects on the myometrial cells with the IC 50 value and its 95% CI of 49.1 (28.3-85.0), 14.5 (7.7-27.4), and 2.6 (1.2-5.6) μmol/L at 20, 40, and 60 h, respectively. Compared with control, gossypol 0.1-3.0 μmol/L markedly decreased the protein expression of Bcl-2 (P<0.05) in both leiomyoma and myometrial cells in a concentration-dependent manner, and significantly suppressed the level of phospho-Tyr416Src (P<0.05) in both cell types at 3.0 µmol/L without obvious alteration of c-Src and phospho-Tyr527Src levels (P>0.05). In addition, gossypol markedly reduced both the expression of ERα (P<0.05) at the low concentration of 0.1 µmol/L in the myometrial cells and the level of phospho-ser167ERα (P<0.05) at the high concentration of 3.0 µmol/L in the leiomyoma cells. Conclusion: Gossypol inhibits proliferation and induces apoptosis in human uterine leiomyoma and myometrial cells. It is likely that the mechanisms of action involve reducing the protein level of Bcl-2 and the activity of Src and ERα.

Uterine leiomyoma in young women: Clinical and morphological aspects

“…В связи с этим указывается, что эстроген не следует рас-сматривать в качестве митогенного средства, данный сте-роидный гормон способствует увеличению в клетках ре-цепторов прогестерона, через которые и осуществляется воздействие последнего, приводящее к пролиферации клеток и накоплению внеклеточного матрикса. Как из-вестно, внеклеточный матрикс состоит из фиброзного/ коллагенового компонента, различных факторов роста, цитокинов, протеаз, провоспалительных и ангиогенных факторов, также участвующих в пролиферации и диффе-ренцировке опухолевых клеток, при этом не исключается существенное значение прогестерона [11][12][13][14][15][16][17][18][19][20]. Согласно нашим наблюдениям, васкуляризация тка-ни лейомиомы была вариабельной как в опухоли, так и в неизмененном миометрии.…”

“…При этом не исключается, что прогестерон способствует росту лейомиомы, воздействуя на ключевые гены, регулирующие пролиферацию и апоп-тоз [11][12][13][14][15][16]. Немалое значение в патогенезе лейомиомы придается различным факторам роста и ангиогенезу, по-скольку в последнем участвуют сосудистый эндотелиаль-ный фактор роста (VEGF), основной фактор роста фибро-бластов (FGF2) и др., экспрессия которых регулируется стероидными гормонами [14][15][16][17]. Наши исследования указывают на тенденцию к «омоложению» пациенток с данным заболеванием, ведущих активную половую жизнь, планирующих беременность на более поздний ре-продуктивный период.…”

Ginsenoside Rh2 suppresses growth of uterine leiomyoma in vitro and in vivo and may regulate ERα/c-Src/p38 MAPK activity

“…UL cells were cultured as we described previously (Zhu et al, 2010(Zhu et al, , 2012. Briefly, UL tissue samples were digested at 37°C in pre-warmed 0.25% trypsin-EDTA and HBSS containing 2.0% type II collagenase (wt/vol) until the tissues disintegrated.…”

“…Cells were cultured in 96-well plates and treated with DMSO or graded concentrations of Rh2 (0.01, 0.1, 1.0, 10, 50, or 100 µmol/L) for 24, 48, and 72 h, according to our previous report (Zhu et al, 2010(Zhu et al, , 2012. Using a spectrophotometric plate reader (Bio-Tek ELX-800, Winooski, VT, USA), the absorbance (OD) at 450 nm was recorded to determine cell viability.…”

“…Here, we investigated the impact of Rh2 on UL growth in vitro and in vivo. Because activation of c-Src and p38 MAPK were reported to contribute to the growth of ULs (Zhu et al, 2007(Zhu et al, , 2010(Zhu et al, , 2012, we further investigated the effect of Rh2 on several signalling molecules, including oestrogen receptor alpha (ERα), c-Src, and p38 MAPK.…”