Genetic transformation and plant recovery from mature tissues of Citrus sinensis L. Osbeck

Almeida, Weliton Antônio Bastos de; Filho, Francisco de Assis Alves Mourão; Pino, Lílian Ellen; Boscariol, R. L.; Rodriguez, Adriana Pinheiro Martinelli; Mendes, Beatriz Madalena Januzzi

doi:10.1016/s0168-9452(02)00401-6

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“…Entretanto, , ao estudarem a transformação genética a partir de segmentos de epicótilo de laranja 'Hamlin', constataram que o cultivo dos segmentos juntamente com com Agrobacterium na ausência de luminosidade, foi mais eficiente na regeneração e obtenção de brotos GUS + . Almeida et al (2003) realizaram estudos anatômicos em segmentos internodais de citros, cultivados in vitro, e constataram que as gemas adventícias têm origem endógena, mais precisamente, formando-se por sucessivas divisões das células cambiais. Moura et al (2001) induziram maior número de gemas por explante, quando seccionaram as extremidades dos explantes de citros e relataram que esse aumento está relacionado com uma maior formação de zonas meristemáticas, em função do corte nos tecidos.…”

Section: Comprimento Do Explante (Cm) Explantes Responsivos (%)unclassified

“…Almeida et al (2002Almeida et al ( , 2003 relatam que essa baixa eficiência pode estar relacionada com a dificuldade de contato da Agrobacterium com as células competentes à morfogênese in vitro.…”

Section: Comprimento Do Explante (Cm) Explantes Responsivos (%)unclassified

“…Trabalhos de transformação genética de citros (Peña et al, 1995Cervera et al, 2000;Almeida et al, 2002Almeida et al, , 2003 têm realizado microenxertia de brotações regeneradas in vitro, em virtude do baixo índice de enraizamento. Neste trabalho, foi obtido 100% de pegamento das brotações microenxertadas.…”

Section: Comprimento Do Explante (Cm) Explantes Responsivos (%)unclassified

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Regeneração de plantas de laranja 'Pêra' via organogênese in vitro

Silva

Costa

Souza

et al. 2005

Pesq. agropec. bras.

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Resumo -O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo eficiente de regeneração de plantas in vitro, via organogênese em explante juvenil de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis L. Osbeck), para atender futuros trabalhos de transformação genética. Segmentos de epicótilo utilizados como explantes foram introduzidos em meio de cultura MT. A fim de maximizar a regeneração de plantas in vitro, foram realizados experimentos para avaliar as concentrações de BAP no meio de cultivo (0, 1, 2, 3 ou 4 mg L -1 ), tamanho (0,25, 0,5 ou 1 cm), polaridade (basal, medial e apical), posição (horizontal ou vertical), condições de luminosidade (fotoperíodo de 16 horas e escuro por 30 dias) e seccionamento nas extremidades dos explantes, bem como melhores condições para garantir plantas enraizadas (meio MT, MT/2, com ou sem auxina e microenxertia). A combinação de 3 mg L -1 de BAP com segmentos de 0,25 cm de comprimento foi eficiente na resposta organogenética. Segmentos apicais e mediais apresentaram melhores resultados do que os basais. O cultivo dos segmentos na posição horizontal, em fotoperíodo de 16 horas, foi mais eficiente do que na posição vertical. Não houve melhora na indução da organogênese in vitro, quando foram seccionadas as extremidades dos explantes. A microenxertia assegurou 100% de brotos enraizados.Termos para indexação: Citrus sinensis, cultura de tecidos, explante juvenil, benzilaminopurina, microenxertia. Regeneration of 'Pera' sweet orange plants through in vitro organogenesisAbstract -The objective of this work was to establish an efficient protocol for in vitro regeneration of plants through organogenesis of sweet orange 'Pera' (Citrus sinensis L. Osbeck) juvenile explants, in order to give support for future studies of genetic transformation. Epicotyl segments used as explants were introduced in MT culture media. To maximize the regeneration of in vitro plants, experiments were performed to evaluate different concentrations of BAP in the culture media (0, 1, 2, 3 or 4 mg L -1 ), size (0.25, 0.5 or 1 cm), polarity (basal, medium, and apical), position (horizontal or vertical), luminosity conditions (photoperiod of 16 hours, and darkness for 30 days), and incision of the segment ends. In addition, better conditions for obtaining rooted plants (culture media MT, MT/2, with and without auxin and micrografting) were studied. The combination of 3 mg L -1 BAP with segments of 0.25 cm length was efficient for the organogenetic response. Segment apices and mediums were more efficient comparing to the basal parts. Culturing the segments in the horizontal position, with a photoperiod of 16 hours, was more efficient than in the vertical position. There was no improvement in the induction of in vitro organogenesis, when the explant ends were incised. Micrografting assured 100% of rooted shoots.

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Section: Comprimento Do Explante (Cm) Explantes Responsivos (%)unclassified

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Regeneração de plantas de laranja 'Pêra' via organogênese in vitro

Silva

Costa

Souza

et al. 2005

Pesq. agropec. bras.

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“…A organogênese in vitro também tem sido obtida a partir do cultivo de tecido adulto como discos de folha e segmentos internodal coletados de plantas adultas cultivadas em casa-de-vegetação (CERVERA et al, 1998a;ALMEIDA et al, 2003;KOBAYASHI et al, 2003;CERVERA et al, 2008). Com a utilização de tecido adulto é possível obter plantas a partir da organogênese in vitro que apresentem características de plantas adultas e floresçam rapidamente após o seu desenvolvimento (KOBAYASHI et al, 2003).…”

Section: ) E Segmento De Hipocótilo (Maggon; Singh 1995)unclassified

“…Os citros apresentam algumas características relacionadas à sua biologia reprodutiva, tais como, alta heterozigose, poliembrionia nucelar (apomixia), longo Agrobacterium tumefaciens, sendo esse o método mais empregado para a obtenção de plantas transgênicas de citros (HIDAKA et al, 1990;KANEYOSHI et al, 1994;PEÑA et al, 1995;GUTIÉRREZ;LUTH;MOORE, 1997;CERVERA et al, 1998aCERVERA et al, , 1998bGHORBEL et al, 2000GHORBEL et al, , 2001ALMEIDA et al, 2003;MOLINARI et al, 2004;PEÑA et al, 2004b;RODRÍGUEZ et al, 2008).…”

Section: Transformação Genética De Citrosunclassified

Organogênese in vitro e transformação genética de limão 'Volkameriano' (Citrus volkameriana) e laranja azeda (Citrus aurantium)

Tavano¹

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Dados Internacionais de Catalogação na Publicação (CIP) DIVISÃO DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO -ESALQ/USP Tavano, Eveline Carla da RochaOrganogênese in vitro e transformação genética de limão 'Volkameriano' (Citrus volkameriana) e laranja azeda (Citrus aurantium) / Eveline Carla da Rocha Tavano. A transformação genética possibilita a introdução de genes de interesse agronômico no genoma das plantas e pode ser empregada na tentativa de obter plantas resistentes a doenças. No entanto, para se obter uma planta transgênica é necessário primeiramente estabelecer um procotolo eficiente de regeneração de plantas in vitro. Assim, o objetivo desse trabalho foi estudar a organogênese in vitro e a transformação genética de limão 'Volkameriano' e laranja azeda com um fragmento do gene da capa protéica do CTV. Para a organogênese in vitro utilizou-se, como explante, segmento internodal, obtido de planta cultivada em casa-de-vegetação, segmento de epicótilo, coletado de plântula cultivada in vitro e segmento de cotilédone associado ao hipocótilo obtido de semente introduzida in vitro. Esses explantes foram mantidos em meio de cultura EME suplementado com 6-benzilaminopurina (BAP -0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg L -1 ), sendo incubados sob fotoperíodo de 16 h de luz ou em condições de escuro por 30 dias e então transferidos para fotoperíodo de 16 h de luz. A avaliação foi realizada após 45 dias de cultivo, determinando-se o número de explantes responsivos e o número de gemas por explante. A caracterização anatômica do processo de regeneração foi realizada por meio de cortes histológicos. Pela análise dos dados foi possível verificar que a organogênese in vitro ocorreu a partir dos três tipos de explantes testados, sendo que, nas duas espécies em estudo, os melhores resultados foram obtidos com o cultivo de segmento de cotilédone associado ao hipocótilo. As concentrações de BAP que estimularam as melhores taxas de regeneração foram de 1,0 e 1,5 mg L -1 , para limão 'Volkameriano', e 0,5 e 1,0 mg L -1 para laranja azeda. A incubação dos explantes em ausência de luz favoreceu a regeneração in vitro. Pela análise histológica foi possível observar que o processo de regeneração, a partir dos três tipos de explantes testados, ocorreu por meio de organogênese indireta. O protocolo de desenvolvimento estabelecido durante os experimentos de organogênese in vitro foi utilizado para a transformação genética dessas espécies via Agrobacterium, contendo o plasmídeo pCAMBIA 2201, com um fragmento do gene da capa protéida do CTV, em uma construção gênica do tipo 'hairpin'. As gemas de limão 'Volkameriano' e laranja azeda identificadas como transgênicas pelo teste histoquímico GUS foram enxertadas in vitro em citrange 'Carrizo'. A confirmação da transformação genética foi realizada pela análise de PCR, a qual mostrou a amplificação de um fragmento de 671 pb, correspondente a parte do gene amplificada. Genetic transformation permits the introduction of agronomically important genes in plant genome and can be utilized in order to produce disease resista...

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Citrus

Peña

Cervera

Fagoaga

et al. 2008

Compendium of Transgenic Crop Plants

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Citrus is the most important fruit tree crop in the world, with a production of more than 100 million tons annually. The area of origin of Citrus is believed to be southeastern Asia, where its domestication started. It has become clear that only citron, mandarin, and pummelo are true species within genus Citrus, being other important Citrus types, as sweet orange, sour orange, lemon, lime, grapefruit and other mandarins originated from hybridization between these ancestral species. In spite of the many efforts put in classical breeding programs in the last 100 years, current citrus industry relies on various groups of varieties that are grafted onto rootstocks adapted to different abiotic and biotic stresses. Most of these genotypes have been generated by chance, mostly as budsports but also as natural hybrids or seedlings selected by men in the wild or in orchards. Citrus breeding is complicated due to its complex reproductive biology. In this context, genetic transformation offers an important alternative for the genetic improvement of citrus. Moreover, it is probably the most efficient approach to make reverse genetics in citrus to investigate gene function and thus to gain better understanding in metabolic processes and plant‐pathogen‐environment interactions.

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Genetic transformation and plant recovery from mature tissues of Citrus sinensis L. Osbeck

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Regeneração de plantas de laranja 'Pêra' via organogênese in vitro

Regeneração de plantas de laranja 'Pêra' via organogênese in vitro

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Citrus

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