Estudo comparativo de técnicas de screening para avaliação da atividade anti-bacteriana de extratos brutos de espécies vegetais e de substâncias puras

Abstract

Recebido em 3/1/07; aceito em 25/9/07; publicado na web em 2/4/08 COMPARATIVE STUDY OF SCREENING TECHNIQUES FOR ANTIBACTERIAL ACTIVITY EVALUATION OF PLANT CRUDE EXTRACTS AND PURE COMPOUNDS. In this work, the effectiveness of four screening techniques (three techniques of the diffusion method and one microdilution broth method) were compared. Evaluated were the ethanolic and dichloromethanic extracts of Miconia rubiginosa (Melastomataceae) against six standard bacteria (ATCC). The results showed statistical disagreement among the three diffusion techniques. Among the diffusion techniques, the well technique displayed the best result. However the microdilution broth method demonstrated to be the most adequate method to evaluate the antibacterial activity of plant crude extracts and pure compounds when compared to the other methodologies.Keywords: antimicrobial activity; screening methods; plant extracts. INTRODUÇÃOAtualmente existem diversas técnicas de screening para definir se o extrato de uma determinada planta possui atividade antimicrobiana, desde as mais simples, que podem ser realizadas rotineiramente, até as mais sofisticadas, que muitas vezes se tornam indisponíveis em alguns laboratórios. Apesar disso, há poucos estudos que relatam qual o melhor método de screening a ser utilizado de acordo com o tipo de extrato a ser testado, mesmo no que se refere às técni-cas mais simples. Por vezes, relatos de resultados em diferentes artigos publicados com uma mesma planta são apresentados de maneira distinta em relação à atividade antimicrobiana, às vezes até mesmo discrepantes, mesmo naqueles em que foram utilizadas as mesmas condições de experimento (ex: solvente utilizado para extração, temperatura, tempo de incubação e microrganismos indicadores), embora as técnicas ou modificações empregadas nos méto-dos de screening para avaliar a atividade antimicrobiana por diferentes autores não tenham sido as mesmas. 1 Os dois métodos mais comumente utilizados para o screening de extratos de plantas com potencial antibacteriano são o de difusão em ágar e de diluição em caldo. O método de difusão em ágar pode ser realizado através das técnicas do disco, do poço ou template. 2-4 Diversas modificações já foram realizadas nas metodologias de screening a fim de se obter resultados mais confiáveis, uma vez que alguns fatores, tais como composição do meio de cultura, microrganismos testados, método de extração, pH e solubilidade das amostras no meio de cultura, podem alterar os resultados, sendo difícil, portanto, padronizar um procedimento. 1 Quando se utiliza o método de difusão vários fatores podem se tornar fontes de erros, tais como composição do meio de cultura, preparação incorreta do meio de cultura, espessura do meio de cultura, densidade do inóculo incorreta, uso de swab com excesso de caldo para inoculação das placas, temperatura e tempo de incubação inadequados, interações entre o antimicrobiano e o meio de cultura, utilização errada da atmosfera de CO 2 quando necessária, leitura prematura, erro na medida das zonas ...

Antimicrobial and antioxidant activity of essential oil and different plant extracts of Psidium cattleianum Sabine

“…When scientific articles are compared, the differences between the phytochemical constituents and their concentrations can result from several factors, such as intraspecific genetic variability, environmental aspects, collection times, growing conditions, soil type, and part of the plant analyzed, which can influence both the content of compounds present in the essential oil and its chemical composition (Alves et al, 2008).…”

Comparação de métodos para avaliação da atividade antimicrobiana e determinação da concentração inibitória mínima (cim) de extratos vegetais aquosos e etanólicos

“…Isso provavelmente pode ser explicado pelo fato de a metodologia do poço propiciar mais facilidade de contato entre os antimicrobianos e os micro-organismos testados (Alves et al, 2008).…”

“…Resultados semelhantes foram descritos por Alves et al (2008), ao avaliarem a atividade antimicrobiana de extratos etanólico e diclorometânico de Miconia rubiginosa (Melastomataceae), utilizando os métodos de difusão em ágar e em caldo frente às bactérias Gram-positivas e negativas. Os autores observaram que, no teste de microdiluição em caldo, os extratos apresentaram atividade antibacteriana em que as CIMs variaram entre 250 e > 400 μg.mL -1 , superior ao teste de difusão em ágar ou disco, sendo verificadas as medidas dos halos somente entre 100 e 300 mg.mL -1 .…”

Production biomolecule with inhibitory activity against Gram-negative bacteria isolated from faeces of broilers and swine

“…The sensibility in inhibition determined by a spectrophotometric method is more accurate than physically measuring the zones of inhibition, because it is free of human errors. Other sources of errors in the well diffusion assay can involve the plate's preparation and the composition of culture medium (Alves et al, 2008). Lactic acid bacteria (LAB) are widely recognized as antimicrobial substances producers and those of proteinaceus nature, the bacteriocins, are of great interest for industrial application in the control of food spoilage, especially for the meat and dairy products (Sivakumar et al, 2010;Bordignon Junior et al, 2010;Abrams et al, 2011).…”