Enhancement of genetic apparatus of teleost fish embryos after snRNA microinjection

Abstract

Введение. Функции низкомолекулярных РНК <нмРНК> исследованы до сих пор недостаточно. В обзорах по нмРНК упоминается ряд внутриклеточных процессов, которые протекают с участием нмРНК [1, 2], однако надежные доказательства известны в единичных случаях. В частности установлено, что нмРНК участвуют в терминации трансляции секретируемых белков [3]. Появление нескольких гипотез, описывающих участие нмРНК в сплайсинге высокомолекулярных РНК [4][5][6][7][8], сыграли инициирующую роль в повышении интереса к исследованию нмРНК. Недавно были получены первые доказательства в пользу этих гипотез [9,10].Значительный интерес привлекает возможность участия низкомолекулярных РНК в регуляции транскрипции. При использовании системы изолированных ядер наблюдают в основном ингибирующий эффект нмРНК или же его отсутствие [И-13], а в живых клетках нмРНК стимулируют транскрипцию [14,15]. При этом активные фракции нмРНК, выявленные в опытах, способны стимулировать транскрипцию и в системе изолированных ядер [16].Ранее нами было показано, что после инъекции в оплодотворенные яйцеклетки вьюна 0,35 М NaCl экстракта ядер, полученного из зародышей вьюна на стадии гаструлы, включение меченых предшественников в РНК после активации транскрипции возрастает [17]. Далее мы показали, что фракция нмРНК обладает стимулирующим транскрипцию действием. Предварительное сообщение о результатах этой работы было опубликовано ранее [18].В данной работе мы описали эффект усиления синтеза основных макромолекул клетки на ранних стадиях развития зародышей костистых рыб-вьюна (Misguruus fossilis L.) и форели (Salmo gairdnerii) вследствие введения нмРНК, исследовали распределение инъецированных нмРНК между клеточными компартментами, связь распределения нмРНК с внутриклеточным перемещением негистоновых белков (НГБ). Появление в клетках зародыша гомо-и гетерологичных нмРНК приводит к значительному усилению включения радиоактивных предшественников в макромолекулы клетки (ДНК, РНК и белок). Инъецированные нмРНК накапливаются в ядрах клеток зародыша и это координирует с переходом НГБ из цитоплазмы в ядра клеток.Материалы и методы. Уридин-5-3 Н (1,03 ТБк/мМ = 28 Ки/мМ); тимидин-2-14 С (2,0 ГБк/мМ = 55,2 мКи/мМ); Д, Л-лейцин-2-3 Н (0,32 ТБк/мМ=8,7 Ки/мМ); Д, Лтриптофан-14 С (0,25 ГБк/мМ=7,1 мКи/мМ); Л-триптофан-3 Н 2 (1,65 ТБк/мМ = = 45 Ки/мМ)-фирмы «Изотоп», СССР; агароза («Sigma», США); протеиназа К {«Boehringer», ФРГ); сефароза 4В («Pharmacia», Швеция); диэтилпирокарбонат («Koch-14 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, ,т.1 №1

The translational regulation of maternal mRNAs in time and space

“…In this case, the zygotic transcription has been detected by cultivating the isolated blastoderms at specific stages (7 hpf, note that at optimal temperature, the loach develops approximately twice slower compared to zebrafish) with radioactively labeled precursors of DNA, RNA, and protein for 1 h and measuring radioactivity of the trichloroacetic acid filter precipitate in the liquid scintillation counter. The relative increase of transcription as defined by incorporation of tritiated uridine was higher comparing to replication and protein synthesis as defined by incorporation of labeled thymidine and leucine, correspondingly [168][169][170]. In other words, an excess of snRNA seems to cause a prolongation of the 'vitogenetic' function [171].…”