Apesar de a cana-de-açúcar responder à adubação nitrogenada, principalmente na cana-soca, o uso de fontes minerais de N constitui-se em um dos fatores de maior impacto sobre o custo de produção da cana-de-açúcar. Estudos apontam que a utilização de bactérias diazotróficas pode suprir parte da necessidade de nitrogênio da cana-de-açúcar. Objetivou-se, neste trabalho, identificar inseticidas utilizados na cultura da cana-de-açúcar que não afetam o crescimento-ou não causam prejuízos à capacidade de fixação biológica de nitrogênio (FBN)-da bactéria diazotrófica Herbaspirillum seropedicae. Cinco inseticidas (imidacloprid, fipronil, thiamethoxam, endosulfan e carbofuran) foram testados, em suas respectivas doses comerciais, quanto ao impacto sobre os parâmetros de crescimento da bactéria. Os parâmetros analisados foram duração da fase lag, tempo de geração e densidade celular máxima. Também foi avaliado o impacto dos inseticidas na atividade da nitrogenase de H. seropedicae cultivada em meio semissólido. Os inseticidas endosulfan e carbofuran prejudicaram o crescimento da bactéria diazotrófica H. seropedicae, contudo não reduziram a FBN in vitro. Carbofuran promoveu aumento no tempo de geração e redução na duração da fase lag de H. seropedicae; o inseticida endosulfan, por sua vez, ocasionou aumento na duração da fase lag. Os inseticidas imidacloprid, fipronil e thiamethoxam não ocasionaram nenhum efeito deletério tanto no crescimento quanto ao FBN in vitro de H. seropedicae.